SMCC交聯劑偶聯載體蛋白KLH和多肽過程

蛋白質交聯劑是一類小分子化合物，具有2個或者更多的針對特殊基團（-NH2、-COOH、-HS等）的反應性末端，可以和2個或者更多的分子分別偶聯，從而使這些分子結合在一起，然后形成共軛蛋白。

產品名稱：SMCC

簡介：SMCC crosslinker (Succinimidyl-4-[N-maleimidomethyl]cyclohexane-1-carboxylate) is a heterobi-functional protein crosslinker with a maleimide group that is sulfhydryl (thiol; -SH) reactive and a NHS ester group that is amine reactive. The SMCC crosslinking reagent is permeable across the lipid bilayer of the cell membrane. The 9 atom spacer arm of SMCC is not cleavable.

Molecular Weight: 334.3

CAS #: 64987-85-5

Spacer Length: 8.3 ?

Alternative Names: 4-(N-Maleimidomethyl)cyclohexanecarboxylic acid N-hydroxysuccinimide ester;

產品名稱：Sulfo-SMCC

Sulfo-SMCC crosslinker (Sulfosuccinimidyl-4-[N-maleimidomethyl]cyclohexane-1-carboxylate) is a water soluble, heterobifunctional crosslinker. Sulfo-SMCC crosslinking reagent has an 8.3 angstrom non-cleavable spacer arm and its maleimide group reacts with sulfhydryls (thiols), while the Sulfo-NHS ester is reactive toward primary amines. Sulfo-SMCC can be used to pro-duce antibody-protein crosslinked conjugates or efficiently label cell surface proteins.

Molecular Weight: 436.4

CAS #: 92921-24-9

Spacer Length: 8.3 ?

SMCC是一類含有N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活性酯和馬來酰亞胺的雙功能偶聯劑.可以將分別含有巰基和氨基的化合物鍵接在一起。該交聯試劑可滲透到細胞膜的脂質雙層中，NHS活性酯與伯胺在PH7-9的環境形成酰胺鍵。馬來酰胺與巰基在PH6.5-7.5的環境下形成穩定的硫醚鍵。在水溶液中，NHS活性酯的水解是（與氨基的反應）個競爭反應。馬來酰胺比NHS穩定，但是在PH大于7.5時，馬來酰胺會慢慢水解，失去與巰基反應的特異性。因而，在使用SMCC時通常是在PH7.2-7.5的環境下進行，并且先讓NHS發生反應。

SMCC結構里的環己烷環可以降低馬來酰胺的水解速率。這使得蛋白質在用SMCC修飾之后可以凍干存放一段時間。很多蛋白質都選用該試劑來進行馬來酰亞胺修飾。

KLH (Keyhole Limpet Hemocyanin)，即血藍蛋白，是在某些軟體動物、節肢動物(蜘蛛和甲殼蟲)的血淋巴中發現的一種游離的藍色呼吸色素。血藍蛋白含兩個直接連接多肽鏈的銅離子，與含鐵的血紅蛋白類似，它易于氧結合，也易與氧解離，是已知的惟一可與氧可逆結合的銅蛋白，氧化時呈青綠色，還原時呈白色。其分子量45０ ０00～１30 000。由于KLH比BSA有更高的免疫原性，因而是常被選用的載體蛋白。

用SMCC來制備抗體-酶或者半抗原作載體的蛋白質，經常采用兩步合成法。步驟一，含有氨基的蛋白質與幾倍的偶聯劑反應，反應結束后通過脫鹽柱或者透析的方法除掉沒有反應完的SMCC。然后，再與含有巰基的蛋白質反應。在實際操作中要注意的是，SMCC怕潮濕，存放時要和干燥劑一起存放。并且使用中從冰箱拿出來時要先在室外放置一段時間平衡溫度，以免立刻開啟，空氣中水分遇冷凝結，破壞SMCC 結構。

1、 將 20 mg SMCC（這是聯接40條多肽的量）溶于2 ml DMF。

2、 將0.8 ml KLH加入到25 ml圓底燒瓶中，補加1×PBS(pH 7.2)使蛋白終濃度為 15 mg/ml。

3、 將溶解好的SMCC溶液緩慢滴加到120 mg KLH 蛋白體系中，室溫攪拌反應1h。

4、 用1 L 1×PBS (PH 7.4) 溶液于4℃下透析 6 小時，除去游離的SMCC。

5、 將透析后的KLH蛋白倒入50 ml離心管中，通過離心管的刻度確定其體積，根據反應前加入的KLH蛋白的量來計算透析后蛋白的濃度，然后根據其濃度將2.5 mg KLH-SMCC溶液轉移到5 ml離心管中。
例如：反應前加入KLH蛋白的量為120 mg，透析后的KLH蛋白體積為20 ml，那么透析后的KLH蛋白濃                                                      μl KLH-SMCC溶液轉移到5 ml離心管中。

6、 將 3.0 mg 多肽用 0.6 ml 1×PBS (pH 7.2) 溶液溶解。
注意：這里多稱量出0.5 mg多肽是用來做ELISA檢測的，取出100 μl即可。檢測多肽隨交聯好的抗原一起寄出，濃度為5 mg/ml。

7、 用Ellman試劑檢測多肽中的巰基：在96孔板中加入100 μl Ellman試劑儲備液，再加入10μl多肽溶液，用Nano分光光度計在λ=412 nm下測其紫外吸收值，如果OD值>0.15做 下一步；OD值<0.15并>0.05補加多肽，直至達到要求；OD值<0.05返回多肽合成步驟重新質控。
Ellman試劑是用來檢測游離巰基的，如果檢測液顯黃色說明多肽的Cys的巰基大部分以游離態存在；如果檢測液不顯黃色則說明多肽Cys中的巰基已經被氧化形成二聚體或多聚體。

8、 將多肽液滴加到KLH-SMCC管中，室溫下用垂直混勻器混勻反應4小時。

9、 用Ellman試劑檢測多肽中的巰基：在96孔板中加入100 μl Ellman試劑儲備液，再加入10 μl 教練后的多肽溶液，用Nano分光光度計在λ=412 nm下測定紫外吸收值。OD值<0.03說明多肽和KLH蛋白交聯率已達到80%以上；OD值>0.03則再補加SMCC活化好的KLH蛋白繼續交聯。如果Ellman試劑顯黃色說明多肽與KLH蛋白偶聯不完全；如果Ellman試劑不顯黃色則說明多肽已經全部與KLH蛋白偶聯。

西安齊岳生物科技有限公司是西北一家**經營進口生化科研試劑的公司，產品服務于納米靶向試劑、**傳遞系統、點擊化學等領域。西安齊岳生物科技有限公司可以提供一系列的蛋白交聯劑，包含有同端雙功能交聯劑，異端雙功能交聯劑，氘代交聯劑，生物素交聯劑及其他種類交聯劑等等產品。我們提供的交聯劑產品小包裝是100毫克，價格便宜，品質較好深受廣大科研客戶歡迎。

（一））：生物素交聯試劑

Biotinylation Reagents生物素化試劑

Sulfo-NHS-Biotin     CAS Number: 119616-38-5

NHS-Biotin          CAS Number: 35013-72-0

Sulfo-NHS-LC-Biotin  CAS Number: 127062-22-0

NHS-LC-Biotin       CAS Number: 72040-63-2

Sulfo-NHS-SS-Biotin  CAS Number: 325143-98-4

NHS-SS-Biotin       CAS Number: 142439-92-7

Biotin Hydrazide      CAS Number: 66640-86-6

Biotin-HPDP         CAS Number: 129179-83-5

Iodoacetyl-LC-Biotin   CAS Number: 93285-75-7

（二）Heterobifunctional Crosslinkers異型雙功能交聯劑：

SMCC Crosslinker           CAS Number: 64987-85-5

Sulfo-SMCC Crosslinker      CAS Number: 92921-24-9

Sulfo-SANPAH Crosslinker    CAS Number: 102568-43-4

SMPH Crosslinker

PDPH Crosslinker

MBS Crosslinker             CAS Number: 58626-38-3

Sulfo-MBS Crosslinker

SPDP Crosslinker            CAS Number: 68181-17-9

LC-SPDP Crosslinker  

Sulfo-LC-SPDP Crosslinker

SIA Crosslinker              CAS Number: 39028-27-8

SBA Crosslinker             CAS Number: 42014-51-7

SMPB Crosslinker           CAS Number: 79886-55-8

BMPS Crosslinker           CAS Number: 55750-62-4

EMCS Crosslinker           CAS Number: 55750-63-5

GMBS Crosslinker          CAS Number: 80307-12-6

ANB-NOS Crosslinker        CAS Number: 60117-35-3

Homobifunctional Crosslinkers同型雙功能交聯劑：

BS3 Crosslinker           CAS Number: 82436-77-9

DSS Crosslinker           CAS Number: 68528-80-3

BS2G Crosslinker

DSG Crosslinker          CAS Number: 79642-50-5

DSP Crosslinker           CAS Number: 57757-57-0

DTSSP Crosslinker        CAS Number: 81069-02-5

Sulfo-EGS Crosslinker     CAS Number: 167410-92-6

EGS Crosslinker          CAS Number: 70539-42-3

DST Crosslinker          CAS Number: 62069-75-4

Zero-Length Crosslinkers - EDC-HCl, Sulfo-NHS & NHS：

EDC-HCl               CAS Number: 25952-53-8

Sulfo-NHS              CAS Number: 106627-54-7

Deuterated Crosslinker BS3-d4

Deuterated Crosslinker BS2G-d4

Deuterated Crosslinker DSS-d4

（三）：Protein modification regents （蛋白修飾相關試劑）

Protein Modification Reagents 蛋白質修飾劑：

SATA Protein Modifier

N-Succinimidyl-S-Acetyl-Thioacetate

CAS Number: 76931-93-6

Sulfo-NHS-Acetate

CAS Number: 152305-87-8

Traut's Reagent  

CAS Number: 4781-83-3

HPG

CAS Number: 24645-80-5

Iodoacetic Acid

CAS Number: 64-69-7

BMPA Modifier

CAS Number: 7423-55-4

（四）Immobilization Resins固定化樹脂

Immobilization Resins固定化樹脂

Amino-Reactive Resin

Sulfhydryl-Reactive Resin

Carbohydrate-Reactive Resin

Carboxyl-Reactive Resin

Immobilized Pepsin  

Immobilized Chymotrypsin

【交聯劑的應用】：

細胞膜結構研究

蛋白質結構研究

蛋白質間相互作用研究

生物研究（靶向**）

載體蛋白與半抗原的連接

蛋白質或其他分子的固相化

抗體的標記、標記轉移

蛋白質與核酸的連接

蛋白質修飾等 

【選擇交聯劑應考慮的因素】：

反應特異性

反應指向性

間臂長度性

水溶性

透膜性

一種或兩種反應基團

熱反應還是光電反應

可否切斷

可否碘標

【可與交聯劑反應的基團】：

游離氨基（賴氨酸ε或N末端的氨基）

巰基（半胱氨酸）

羧基（天冬氨酸，谷氨酸，末端羧基）

羥基（絲氨酸或蘇氨酸）

酮基，醛基，糖鏈

苯酚衍生物（苯丙氨酸，色氨酸，酪氨酸）

放射性基團: R-N3 

以上來自小編zhn2020.10.30