乙型肝炎病毒（HBV）的一個特點是前C/C區編碼的構成病毒核衣殼的core蛋白和前C蛋白（precore）存在高度的氨基酸序列同源性，后者經過加工、成熟為分泌型的HBeAg。該研究使用T細胞受體（TCR）轉基因（Tg）、TCR×HBc / HBeAg雙轉基因和三聯轉基因實驗組，證明在該系統中HBeAg引起T細胞耐受，而HBcAg不引起耐受。

 TCR×HBc 雙轉基因小鼠在幼年時就會發生血清轉換，抗-HBc IgG抗體呈陽性；但TCR×HBc×HBe三聯轉基因小鼠血清中存在的HBeAg會阻止抗-HBc血清轉換。HBeAg通過引起HBc/HBeAg特異性T細胞耐受而發揮免疫調節作用。結果表明，HBV之所以保留了核蛋白的分泌形式，是因為它起著T細胞耐受原的作用，調節對胞內核衣殼的免疫應答。這種由HBeAg介導的免疫調節可能會導致圍生期感染的慢性化，并防止成人感染HBV后嚴重肝損傷的發生。

乙型肝炎病毒e抗原（precore或HBeAg）以單體的形式分泌到血清中，而核心抗原（core 蛋白或HBcAg）是包裹病毒DNA和聚合酶的核衣殼的構成成分，參與病毒顆粒組裝。由于氨基酸同源性較高，這兩種抗原形式在T細胞反應水平上具有交叉反應性，但在抗體識別水平上卻不具有交叉反應性。自HBeAg被發現起，因為它并非病毒感染、復制或組裝所必需，其功能廣受猜測。該文作者曾基于小鼠實驗提出HBeAg發揮免疫調節的作用，但相關問題仍有待厘清。Precore、core兩種形式的核蛋白共存于HBV自然感染過程中，并對HBcAg和HBeAg的免疫應答似乎是獨立調節的。例如，HBcAg可以表現為T細胞非依賴性抗原，而對HBeAg的免疫應答則是嚴格的T細胞依賴性的；HBcAg優先誘導Th1細胞，而HBeAg優先誘導Th0/Th2細胞。HBcAg和HBeAg主要的抗原提呈細胞也不同。

HBeAg的T細胞耐受性明顯更高。T細胞對HBeAg的耐受是克隆性的，并且至少可以通過三種機制介導：克隆清除（clonal deletion）、克隆無能（clonal anergy）和克隆忽視（clonal ignorance）。血清HBeAg可能會清除親和力高的T細胞，而中等親和力的HBeAg特異性T細胞可能不會被清除，但仍可以通過克隆無能引發免疫耐受。因此，即使是親和力較低的HBeAg特異性T細胞也容易出現HBeAg誘導的耐受。

既往研究以T細胞受體轉基因（TCR Tg）小鼠譜系為代表，主要集中在單一的對HBc / HBeAg具有中等親和力的特異性T細胞克隆群。而在該研究中，使用表達HBcAg和/或HBeAg的轉基因小鼠繁育TCR-Tg小鼠，以產生7/16-5×HBc、7/16-5×HBe雙轉基因和7/16-5×HBc×HBe三聯轉基因實驗組小鼠，用來檢查內源性HBeAg和HBcAg在單獨和聯合時對特定的HBc/HBeAg特異性T細胞亞群的影響。結果表明，血清HBeAg可以作為**的T細胞耐受原，在HBcAg是強免疫原的轉基因系統中下調對HBcAg的免疫應答。

一、血清HBeAg**自發的抗-HBc IgG抗體血清轉換

作為慢性HBV感染的模型，TCR×HBc/HBeAg 轉基因小鼠被用于探究持續的抗原暴露對T細胞的影響。7/16-5 Tg TCR (Vβ11?-Vα5?)對 HBc/HBeAgs的120–140殘基特異，受I-A? MHC II類分子限制, 表達于53%的CD4? T 細胞。在該研究中，六只表達HBc/HBeAg特異性7/16-5 TCR和HBcAg（7/16-5×HBc）的雙轉基因小鼠在4至6周齡時全部自發血清轉換為抗-HBc IgG抗體陽性（圖1），產生了所有IgG亞型的抗-HBc抗體；豐富程度從高到低依次為IgG2b、IgG2a、IgG1和IgG3。在7/16-5×HBc 雙轉基因小鼠中自發的抗-HBc血清轉換表明，HBcAg沒有耐受性，而是在體內充當7/16-5 T細胞的免疫原。由于顆粒狀HBcAg在B細胞水平上具有很高的免疫原性，因此從肝細胞中“泄漏”出來的少量的這種胞內抗原足以引起自發的抗-HBc血清轉換。

相比之下，在7/16-5×HBe雙轉基因小鼠中，不會引起自發的HBeAg向抗-HBe （IgG抗體）血清轉換，表明7/16-5 T細胞可以耐受血清HBeAg。通過繁殖能夠同時表達7/16-5 TCR、HBcAg和HBeAg的三聯轉基因小鼠，以確定在對HBcAg的免疫原性應答和對HBeAg的耐受性應答之間，誰會占據主導地位。在六只7/16-5×HBc×HBe 三聯轉基因小鼠中，血清中的HBeAg（4-10μg/mL）阻止了其中兩只的自發抗-HBc IgG抗體血清轉換，并在其余四只小鼠中****抗-HBc IgG抗體的產生（圖1）。三聯轉基因小鼠產生的抗-HBc不但抗體低水平，并且抗體出現時間延遲、 IgG亞型有限。據此可見，血清HBeAg是作為一種免疫調節蛋白在體內下調對HBcAg的體液反應。

圖1. 血清HBeAg**抗-HBc自發血清轉換。每組6只7/16-5×HBc雙（dbl）轉基因小鼠和7/16-5×HBc×HBe三聯（tri）轉基因小鼠，3至28周齡之間取血，收集血清，并通過ELISA測定抗-HBc抗體的總IgG和IgG亞型。通過終點稀釋血清定量檢測抗-HBc抗體。符號代表單獨的小鼠。7/16-5 Tg TCR（Vβ11?-Vα5?）對HBc / HBeAgs的120-140殘基具有特異性，受IA ? MHC II類分子限制，并在53％的CD4? T細胞上表達。對照HBcAg單轉基因小鼠未自發產生抗-HBc抗體。

分離7/16-5×HBc、7/16-5×HBe 雙轉基因和7/16-5×HBc×HBe三聯轉基因小鼠的脾細胞，在存在HBcAg或HBeAg的條件下進行體外培養。在脾臟原代培養中，7/16-5×HBc脾細胞產生大量抗-HBc IgG抗體，而7/16-5×HBe雙轉基因脾細胞未產生抗-HBe IgG抗體，且三聯轉基因脾細胞也未產生抗-HBe IgG抗體（圖2 A）。體外脾臟原代培養物中IgG抗體的產生與體內抗-HBc/e IgG抗體的產生平行（圖1）。體外7/16-5×HBe雙轉基因脾細胞未產生抗-HBe IgG抗體，證明在體內檢測不到自發抗-HBe IgG抗體不是由于免疫復合物或血清HBeAg對抗-HBe的掩蓋。

接著檢測脾臟培養上清液中是否有抗-HBc IgM抗體的產生。如圖2 B所示，所有7/16-5 TCR? 雙轉基因和三聯轉基因小鼠的脾細胞在與HBcAg原代培養后均產生抗-HBc IgM抗體（7/16-5 TCR單轉基因脾細胞在與HBcAg原代培養后也產生了抗-HBc IgM抗體），值得注意的是7/16-5×HBc×HBe三聯轉基因小鼠的脾細胞在體外不產生抗-HBc IgG抗體，而會產生高水平的抗-HBc IgM抗體。與7/16-5×HBc雙轉基因脾細胞相比，7/16-5×HBc×HBe三聯轉基因脾細胞中抗-HBc IgG抗體和抗-HBc IgM抗體的生成分別被**和增強。由此可以推斷，在HBeAg存在時，在產生的抗體從抗-HBc IgM轉變為IgG的過程中，Th的重要性降低了；并且，在HBeAg存在的同時又有Th功能不足時，HBcAg一般會誘導產生更多的抗-HBc IgM抗體。這一發現可能與在慢性HBV患者中經常觀察到的抗-HBc IgM抗體的周期性復發有關。

圖2. 7/16-5 TCR? 雙轉基因和三聯轉基因小鼠脾細胞體外抗-HBc/e抗體的產生。向來自7/16-5×HBc和7/16-5×HBe雙轉基因小鼠以及7/16-5×HBc×HBe三聯轉基因小鼠的脾細胞加入不同濃度的重組HBcAg或HBeAg，培養5天。收集培養物上清液，并通過ELISA確定IgG（A）和IgM（B）抗-HBc / e抗體的產生。分析未稀釋的培養物上清液，并將結果表示為OD??? 值，減去從無抗原的培養基對照孔中獲得的背景OD??? 值進行校正。符號代表單獨的小鼠，并且結果代表每組至少五只小鼠。

之前對HBeAg下調抗-HBc血清轉換的簡單解釋是：由于氨基酸序列的高度同源性，血清HBeAg可能在檢測中掩蓋了抗-HBc抗體。然而，實際上將HBeAg-Tg小鼠的血清添加到抗-HBc抗體的稀釋液中不會影響抗-HBc抗體的檢測。對7/16-5×HBc×HBe三聯轉基因小鼠抗-HBc產生減少的**個可能解釋是：表達兩種轉基因的小鼠肝臟中的HBcAg含量較低。盡管HBc/HBe雙轉基因小鼠細胞內HBcAg的表達往往比HBc單轉基因小鼠約少一半，但抗-HBc血清轉換與肝臟中HBcAg含量之間沒有相關性，表明低濃度HBcAg濃度（0.2-2.0μg/ mg肝蛋白）并不是限制抗-HBc抗體產生的原因。

二、血清HBeAg可激發7/16-5 TCR-Tg T細胞耐受

由于7/16-5 TCR-Tg小鼠中HBc/HBeAg特異性T細胞的比例較高（占53％的CD4+T細胞），在體外用HBc/HBeAgs 培養未接觸抗原的脾臟T細胞會產生大量的IL-2和IFN-γ（圖3）。p120-140（對應于HBcAg的120-140殘基的合成肽）能被7/16-5 T細胞識別。分別在HBcAg、HBeAg或p120-140條件下，7/16-5×HBc雙轉基因小鼠的脾T細胞產生的IL-2和IFN-γ與TCR單轉基因小鼠T細胞的產量相當。T細胞對HBcAg缺乏耐受，與7/16-5×HBc雙轉基因小鼠體內抗-HBc IgG抗體的自發產生相符。相比之下，7/16-5×HBe雙轉基因小鼠的脾T細胞在T細胞水平上具有**的耐受性，并且在使用HBc/HBeAg進行體外培養的過程中產生的T細胞細胞因子較少（圖3）。除了細胞因子產生減少，相比于來自TCR單轉基因小鼠的T細胞，來自7/16-5×HBe雙轉基因小鼠的T細胞還表現出HBc / HBeAg特異性增殖缺陷。此外，血清HBeAg在7/16-5×HBe雙轉基因小鼠中引起的T細胞耐受不是由于胸腺或脾臟中7/16-5 T細胞的克隆清除，而是一種無能。測定7/16-5×HBc×HBe三聯轉基因小鼠中T細胞產生的細胞因子，可以證明血清HBeAg誘導了7/16-5 T細胞對HBc/HBeAg的特異性耐受，這與在7/16-5×HBe雙轉基因小鼠中觀察到的特異性耐受程度相同（圖3）。

因此，分泌的HBeAg（而非細胞內HBcAg）能引起7/16-5 T細胞的耐受/無能，血清HBeAg在T細胞水平通過這種方式下調7/16-5×HBc×HBe三聯轉基因小鼠的自發抗-HBc血清轉換。此外，體內激活的7/16-5 T細胞介導7/16-5×HBc雙轉基因小鼠的肝損傷，但是在7/16-5×HBc×HBe 三聯轉基因小鼠中存在的血清HBeAg可**減輕肝損傷。因此，血清HBeAg的免疫調節作用不僅局限于**抗-HBc抗體的產生，還影響HBcAg特異性CD4? T細胞介導的肝損傷。這些結果表明，分泌形式的核蛋白在患者體內的功能是作為**的T細胞耐受原，下調宿主對細胞內表達的HBcAg的免疫應答。

圖3. 血清HBeAg 在7/16-5 T細胞中引起體內耐受/無能。用HBc/HBeAgs（1.0μg/mL）培養7/16-5 TCR單轉基因、7/16-5×HBc雙轉基因、7/16-5×HBe雙轉基因或三聯轉基因小鼠的未接觸抗原的脾細胞（5×10? /mL），分別在第2天和第4天檢測培養上清液中產生的IL-2和IFN-γ細胞因子。每只小鼠體內抗-HBc IgG抗體血清滴度均已標示。數據來自單只小鼠，至少代表三次獨立實驗。

三、在7/16-5 TCR-Tg T細胞中誘導T細胞耐受/無能取決于激活狀態并且可逆

為了評估另一種模型中血清HBeAg調節對HBcAg的免疫應答的能力，將7/16-5供體T細胞分別過繼轉移至HBcAg-Tg、HBeAg-Tg或HBc/HBe雙轉基因受體小鼠的轉移實驗。將初始脾細胞（30×10?）從7/16-5 TCR-Tg供體小鼠過繼轉移至清除了T細胞的HBeAg-Tg受體小鼠中，未產生抗-HBe抗體，表明在這種情況下血清HBeAg對7/16-5 T細胞沒有免疫原性（圖4）；將數量相同的初始7/16-5供體脾細胞過繼轉移至清除T細胞的HBcAg-Tg受體小鼠中，在2-4周內受體小鼠產生高滴度的（1：100000終點稀釋）、包含所有IgG亞型的抗-HBc抗體；而將初始的7/16-5供體脾細胞過繼轉移到HBc/HBeAg雙轉基因受體小鼠中后，僅有很少的抗-HBc抗體產生，為HBcAg單轉基因受體小鼠產生量的0.2％（圖4）。由此可見，除了非免疫原性外，血清HBeAg還可以使轉移的7/16-5 T細胞耐受，不再介導HBc/HBeAg-Tg受體小鼠的抗-HBc血清轉換。該結果與前面觀察到的7/16-5×HBc×HBe三聯轉基因小鼠中沒有自發的抗-HBc血清轉換得結果相符（圖1）。在過繼轉移7/16-5 T細胞后，HBc/HBe雙轉基因受體小鼠中低水平的血清HBeAg（10 ng/mL）也會減少抗-HBc抗體的產生（圖4）。血清HBeAg在T細胞水平上**抗-HBc血清轉換，因為轉移的7/16-5 T細胞未能在HBe單轉基因和HBc/HBe雙轉基因受體小鼠脾臟培養物中產生抗原特異性IL-2，而HBc單轉基因受體脾培養物中細胞因子的產生活躍。同樣，僅在HBc單轉基因受體脾培養物中檢測到了抗-HBc/e IgG抗體的產生。而所有Tg受體小鼠脾臟培養物均產生抗-HBc IgM抗體，且HBc×HBe雙轉基因受體脾細胞中的抗-HBc IgM抗體產生增加。這一結果與7/16-5×HBc×HBe三聯轉基因小鼠脾細胞體外產生的抗-HBc IgM抗體水平升高相一致。

圖4. 誘導7/16-5 T細胞耐受/無能取決于T細胞的活化狀態，并且可逆。將來自7/16-5 TCR Tg小鼠的，含有約3×10? TCR? CD4? T細胞的供體脾細胞（30×10?）過繼轉移到CD4 / CD8清除的HBcAg或HBeAg單轉基因，和HBc/ HBeAg雙轉基因受體小鼠中（每組三只受體小鼠）。供體脾細胞包含初始7/16-5 T細胞、使用p120-140（1.0μg/mL持續3天）體外預激活的7/16-5 T細胞，或從7/16-5×HBe雙轉基因小鼠提取的7/16-5 T細胞。轉移后第2和第4周，給受體小鼠取血，并通過ELISA測定抗-HBc抗體的總IgG和IgG亞型。在用初始7/16-5 T細胞（第1組）過繼轉移的HBeAg-Tg受體小鼠中，測定了抗-HBe IgG抗體。對每組三只受體小鼠的合并血清進行總抗-HBc IgG抗體測定和IgG分型。

實驗通過轉移天然7/16-5供體脾細胞進行。將預激活的7/16-5供體脾細胞（即用p120-140培養）轉移到HBc/e雙轉基因受體中，與轉移初始脾細胞相比，體內產生的抗-HBc抗體增加到50倍（1：10,000滴度）（圖4）。因此，活化的7/16-5 T細胞對受體中血清HBeAg誘導的耐受較不敏感。為了確定7/16-5×HBe雙轉基因小鼠中7/16-5 T細胞的無能狀態是否可逆，將雙轉基因供體中提取的脾細胞也轉移到HBcAg或HBc/HBe雙轉基因受體中。轉移到HBc / HBe 雙轉基因小鼠體內幾乎不會產生抗-HBc抗體，而轉移到HBc單轉基因小鼠中則會導致抗-HBc抗體的產生（1：10,000滴度）（圖4）。轉移到HBc-Tg受體中的無能的7/16-5供體T細胞誘導產生的抗-HBc抗體水平是初始7/16-5供體T細胞對應水平的10%，特定的IgG亞型水平仍為陽性，表明體內暴露于血清HBeAg的7/16-5 T細胞的耐受狀態至少可在沒有耐受原（即HBeAg）的情況下逆轉或發生改變。在該系統中，HBeAg介導的T細胞耐受是非清除性的，并且在沒有耐受原（HBeAg）的情況下是可逆的，因此將其描述為體內無能或適應性耐受。

西安齊岳生物供應抗體種屬∶兔抗單克隆抗體，鼠抗單殼隆抗體。兔抗多殼隆抗體。抗體的濃度為1mglml。抗體及相關標記抗體:HRP標記抗體，Biotin標記抗體，Gold標記抗體，RBITC標記抗體，AP標記抗體,FITC標記抗體，Cy3標記抗體，Cy5標記抗體，Cy5.5標記抗體，Cy7標記抗體，PE標記抗體，PE-Cy3標記抗體，PE-Cy5標記抗體，PE-Cy5.5標記抗體，PE-Cy7標記抗體，APC標記抗體，AlexaFluor 350標記抗體，Alexa Fluor 488標記抗體，Alexa Fluor 555標記抗體，AlexaFluor647標記抗體抗體的交叉反應︰人，小鼠，大鼠，雞，狗，豬，羊，牛，兔.....抗體的應用:可以用于做石蠟切片免疫組化，冰凍切片兔疫組化，Elisa , wB，免疫熒光等實驗。

相關產品

人聚集蛋白(Agrin)elisa試劑盒

小鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)elisa試劑盒

大鼠全段甲狀旁腺素(i-PTH)elisa試劑盒

兔熱休克蛋白70(HSP-70)elisa試劑盒

人激活素A受體Ⅰ(ACVR1) elisa試劑盒

人組織型纖溶酶原激活因子(tPA) elisa試劑盒

人α乳清蛋白(α-La)elisa試劑盒

小鼠膠質細胞系來源的神經營養因子(GDNF)elisa試劑盒

大鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)elisa試劑盒

兔子γ干擾素(IFN-γ)elisa試劑盒

人膜突蛋白(MSN) elisa試劑盒

碳反應蛋白C-Reactive Protein

c 反應蛋白 人

雞體內產生的抗C反應蛋白抗體

山羊產生的抗C反應蛋白抗體（全抗血清）

兔產生抗C反應蛋白抗體

抗C反應蛋白抗體，克隆2A8.1

抗C反應蛋白兔pAb

c反應蛋白，人血清，高純度

C反應蛋白，人，重組，大腸桿菌

人 C 反應蛋白 ELISA 試劑盒

SILu ? 蛋白 CRP C 反應蛋白 人

單克隆抗 C 反應蛋白 小鼠抗

大鼠CRP/C反應蛋白酶聯免疫試劑盒

SILu?Lite CRPC反應蛋白人類

c-反應性/CRP人

小鼠產生單克隆抗CRP抗體

小鼠產生單克隆抗CRP抗體

兔體內產生抗CRP抗體

兔體內產生抗CRP抗體

兔體內產生的抗VAC14抗體

小鼠產生抗單核細胞趨化蛋白單克隆抗體

抗FOXM1抗體

人血清

重組人丙型肝炎病毒非結構蛋白5A反式激活蛋白

羧肽酶N1(CPN1)重組蛋白 

羧肽酶O(CPO)重組蛋白 

細胞維甲酸結合蛋白2(CRABP2)重組蛋白

復合素2(CPLX2)重組蛋白 

半胱氨酸甘氨酸豐富蛋白1(CSRP1)重組蛋白 

半胱氨酸豐富分泌蛋白3(CRISP3)重組蛋白

晶狀體蛋白λ1(CRYλ1)重組蛋白

羧基端結合蛋白2(CTBP2)重組蛋白 

肉毒堿棕櫚酰基轉移酶1A(CPT1A)重組蛋白 

肉毒堿棕櫚酰基轉移酶1B(CPT1B)重組蛋白 

乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活蛋白

乙型肝炎e抗原反式激活蛋白(HBeAgTP)

酸性反式激活蛋白

重組葡萄球菌蛋白a

PAPI改性大豆蛋白復合材料

磷酸鹽/酵母蛋白納米復合材料

FITC標記的丙型肝炎病毒非結構蛋白5A反式激活蛋白9抗體

PE-Cy5標記的丙型肝炎病毒非結構蛋白5A反式激活蛋白9抗體

HRP標記抗體,丙型肝炎病毒非結構蛋白5A反式激活蛋白9抗體

CIITA II型反式激活蛋白,Mouse IgG1 anti-Human,WB/IP

金納米團簇碳納米管血紅蛋白

殼聚糖-磷酸鈣/重組人骨形態發生蛋白2復合材料

人血清蛋白-無機納米復合材料

氧化石墨烯重組鏈球菌蛋白G復合物材料

羊毛角蛋白/氧化石墨烯復合材料

基于金屬—有機骨架材料及石墨烯的C-反應蛋白

zzj 2021.3.25