脂肪組織巨噬細胞來源的外泌體miRNA可在體內和體外調節胰島素敏感性

鑒定巨噬細胞能否分泌miRNA：

（1）小室實驗

用于證明外泌體從供體細胞釋放后，能到達受體細胞，且外泌體以及它體內的貨物均能被受體細胞吸收。將Cy3標記miR-233 mimic的轉染進骨髓源性巨噬細胞（BMDMS），然后培養于Transwell的上室，下室是不表達Cy3標簽的3T3-L1脂肪細胞。共培養12h后，在下室中觀察得紅色熒光的Cy3-miR-233，是共培養前的6倍，表明這兩種細胞間存在一種介質起了運輸miRNA的作用（圖1）。在對照實驗中，我們用Cy3單獨(不與miR-223結合)處理BMDMs，在與這些BMDM共培養12小時后，發現這種熒光染料在BMDMs中的出現可忽略不計，在3T3-L1脂肪細胞中沒有染料出現（圖2）。因此，認為巨噬細胞可以分泌細胞外miRNA，它們被攝取到脂肪細胞中。

鑒定ATM能否分泌外泌體:

為了確認脂肪組織巨噬細胞（ATM）是否可以外泌體，從肥胖野生型小鼠的內臟脂肪組織（VAT）中分離出脂肪組織巨噬細胞(ATM)（CD11b+F4/80+），并培養72小時，電子顯微鏡（圖4）和納米觀察分析（圖5）顯示，通過超速離心分離的顆粒含有豐富的ATM分泌的胞外小泡，其直徑為30-100 nm。這些EV的密度梯度超速離心分析證實，它們主要由Exos組成，通過外體特異性蛋白標記物TSG101、syntenin1、CD63等的表達得到證明，主要以圖6表示。

圖3. 超速離心分離外泌體

圖4.電鏡觀察外泌體**杯狀囊膜結構

圖5.NTA分析外泌體的粒徑和濃度表征

圖6.Westernblot鑒定TSG101等外泌體蛋白標志物

產品供應：

胞外囊泡/細胞微粒/微囊泡/外泌體/EVs/exosomes    

含RNA和蛋白質的小膜泡 (30-150nm)    

綿羊網織紅細胞-外泌體    

直徑40-100nm的盤狀囊泡    

exosome/外泌體    

細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體    

多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中    

細胞在正常及病理狀態下均可分泌外泌體    

細胞類型均可分泌外泌體    

特異性分泌的膜泡    

外泌體含膽固醇和鞘磷脂    

肥大細胞分泌外泌體    

mRNA，exosomes具有生物活性    

41860種蛋白質、2838種microRNA、3408種mRNA    

Rabs蛋白/鳥苷酸三磷酸酶(GTPases）    

調節外泌體膜與受體細胞的融合    

外泌體中含RAB4, RAB5和 RAB11，RAB7 和 RAB9    

膜聯蛋白1、2、4、5、6、7、11    

四跨膜蛋白家族（CD63, CD81 和CD9)    

熱休克蛋白家族（(HSP60, HSP70, HSPA5, CCT2 和HSP90    

細胞特異性的蛋白包括A33（結腸上皮細胞來源）    

MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源)    

CD86(抗原提呈細胞來源)    

乳凝集素（不成熟的樹突狀細胞）    

外泌體中的蛋白含代謝類的酶    

GAPDH    

烯醇化酶 1    

醛縮酶 1    

PKM2    

PGK1    

PDIA3    

GSTP1    

DPP4    

AHCY    

TPL1    

抗氧化蛋白    

P4HB    

LDH    

親環素 A    

FASN,    

MDH1    

CNP    

核糖體蛋白（RPS3）    

信號轉導因子    

黑色素瘤分化相關因子    

ARF1    

CDC42    

人類紅細胞膜整合蛋白    

SLC9A3R1    

粘附因子    

MFGE8    

整合素    

細胞骨架蛋白    

泛素    

人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體    

應用：機體免疫應答    

抗原提呈    

細胞遷移    

細胞分化    

**侵襲    

細胞膜外泌體    

外泌體產生于細胞中的多泡體    

外泌體研究整體方案設計；    

外泌體提取/粒徑測量/電鏡檢測；    

外泌體蛋白組/轉錄組    

客戶提供樣本提取外泌體    

外泌體抽離/抽提    

全自動外泌體熒光檢測分析系統    

外泌體分離產品和工具    

外泌體分離/提取    

外泌體整體技術服務    

外泌體lncRNA芯片    

外泌體small RNA    

外泌體提取    

外泌體染色：PKH67/PKH26    

外泌體WB鑒定    

CD81外泌體慢病毒包裝    

CD63外泌體慢病毒包裝    

CD9外泌體慢病毒包裝    

外泌體粒徑檢測    

外泌體電鏡檢測/透射電鏡    

外泌體蛋白組分析    

外泌體標記/鑒定/分離/提取/    

外泌體(Exosomes)鑒定    

外泌體marker抗體    

外泌體CD9抗體    

外泌體CD81抗體    

外泌體CD63抗體    

外泌體分離單克隆抗體    

Anti CD9,CD63,CD81    

細胞外囊泡標記外泌體單克隆抗體    

細胞外囊泡(外泌體和微囊泡)    

標記外泌體試劑    

外泌體流式細胞分子    

外泌體細胞成像    

外泌體細胞結構成像    

外泌體標記化學    

外泌體熒光選擇標記    

外泌體免疫分析    

外泌體神經科學    

外泌體細胞示蹤    

外泌體細胞追蹤    

外泌體細胞形態學    

外泌體單細胞分析    

外泌體微生物分析    

外泌體熒光微孔技術    

外泌體RNA-微生物    

FITC外泌體捕獲親和磁珠    

CD63抗體免疫捕獲外泌體    

**靶向外泌體    

靶向**衍生外泌體    

外泌體仿生靶向**    

外泌體仿生納米**/顆粒    

外泌體可誘導 T 細胞的凋亡    

調控功能性 T 細胞 (Treg)     

誘導 M2 巨噬細胞的極化    

**自然殺傷細胞 (NK) 的抗**毒性    

**樹突狀細胞的 (DC) 分化為成熟 DC    

外泌體基因改造    

上述產品僅用于科研，不可用于人體試驗！

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