同位素未標記、13C標記和2H標記的2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）處理擬南芥屬T87細胞

建立高準確度和普適性的外源性代謝物檢測和鑒定分析方法對于評價**等化合物的安全性至關重要。基于液相色譜-四極桿串聯高分辨質譜技術（LC/HRMS/MS），先應用穩定同位素標記目標原型化合物（13C和2H），再進行特征峰識別和配對同位素峰過濾鑒定代謝物，通過代謝物隨時間變化的輪廓分析確證代謝物，建立了高準確度的外源性代謝物檢測和鑒定分析方法。

該研究使用未標記、13C標記和2H標記的2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）處理擬南芥屬T87細胞，經液相色譜高分辨質譜分析后進行特征峰識別和配對同位素峰過濾，得到83個候選代謝物，確認了26個2,4-D的代謝物，其中包括10個已報道代謝物和16個新發現的代謝物。

具體研究策略見圖1。

圖1 T87細胞中2,4-D代謝物研究策略

該研究共包括三個數據集：

1、未加藥組和2,4-D給藥組；

2、2,4-D給藥組和13C8-2,4-D給藥組；

3、2,4-D給藥組和2H5-2,4-D給藥組，每組細胞樣品均在加藥0、1、3、7和10天時間點取樣分析。

經質譜分析后數據集1得到30853個特征峰，扣除未加藥組內源性特征峰并進行35Cl/37Cl同位素表型分析后，得到潛在代謝物645個，但這其中仍可能包含大量假陽性結果；數據集2得到34559個特征峰，對2,4-D給藥組和13C8-2,4-D給藥組在0、1、3、7和10天時間點的特征峰峰面積輪廓進行統計分析（火山圖分析，log2-fold change>|1|和p<0.05）排除內源性代謝物，得到差異特征峰1626個，再進行同位素特征峰配對過濾（Δm/z 8.0272 Da，質量偏差＜5ppm），得到候選代謝物81個；數據集3分析處理流程與數據集2相同，得到候選代謝物76個。綜合數據集2和數據集3數據，總共得到候選代謝物83個，三個數據集分析流程見圖2。

圖2 數據集分析流程（a, 數據集1；b, 數據集2；c, 數據集3）

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