抗體偶聯標記生物素/熒光/辣根過氧化物酶/磁珠/瓊脂糖珠

抗體偶聯標記，是以共價偶聯的方式將標記基團連接在抗體上的一種標記技術。

若偶聯在抗體上的基團是熒光染料、熒光蛋白等標記物，偶聯后的抗體可以用來做流式細胞術 FACS 、IF、活體成像等標記示蹤類實驗。若被偶聯在抗體上的是 HRP、AP 等酶類，偶聯后的抗體可以直接跟檢測底物反應，用于 ELISA、WB、IHC 等試驗檢測。若被偶聯的基團是 Biotin，偶聯的抗體可以再同酶聯親和素或酶聯 Anti-Biotin 抗體反應，若抗體直接被偶聯在磁珠、瓊脂糖珠等固相介質上；或通過抗體生物素化，再與鏈霉親和素介質結合后，則能用于靶蛋白復合物親和純化，及其蛋白相互作用研究中。

西安齊岳生物提供定制抗體偶聯標記物，主要提供以下四大類

1.抗體偶聯標記熒光染料、熒光蛋白。

2.抗體偶聯標記HRP、AP 等酶類。

3.抗體偶聯標記Biotin生物素。

4.抗體偶聯標記磁珠、瓊脂糖珠等固相介質上。

抗體是怎么被生物素，熒光，辣根過氧化物酶，磁珠，瓊脂糖珠偶聯標記上的？抗體偶聯標記中的共價化學鍵是如何形成？以下內容為你解答:

抗體偶聯標記相比于抗體標記，多了 “偶聯（conjugation）” 一詞，指抗體和標記基團之間是通過共價鍵連接而成。抗體的標記除了共價標記之外，也可以通過非共價的親和作用力來標記，

 那么抗體偶聯標記中的共價化學鍵是如何形成的呢？跟其他化學反應類似，共價鍵是兩個底物在合適的條件下發生化學反應得到。抗體這個大分子蛋白上常用的反應基團包括：氨基、巰基和羧基（圖 1）。

在能夠跟以上基團起反應的活性反應物上修飾標記基團，完成偶聯反應，經過純化后的產物即是偶聯標記好的抗體。在活性反應物中，常見是對抗體氨基反應的 NHS 酯（N-hydroxysuccinimide esters，N-琥珀酰亞胺基酯）和針對抗體巰基反應的馬來酰亞胺（Maleimides）。這兩個標記反應的化學原理可以參考下面的示意圖（圖 2）。

NHS 酯的標記反應一般在弱堿性的無伯胺緩沖液（如硫酸鹽、碳酸鹽、硼酸鹽緩沖液）中進行，然后用含伯胺緩沖液（如 Tris 鹽，Glycine 緩沖液等）中止反應。NHS 酯極易水解，隨著 pH 升高水解反應越劇烈。NHS 的水溶液在 pH 7.0 的 0°C下，半衰期僅 4-5 小時；pH 8.6 的 4°C下，半衰期降為 10 分鐘。NHS 酯的水解會對其氨基標記反應產生競爭**，使標記效率嚴重下降。因此一般 NHS 類標記試劑都是現配現用，且在保存時需要格外注意避免潮解。對于抗體標記的新手而言，建議選用小包裝分裝好的試劑進行反應。

馬來酰亞胺是標記巰基的常用試劑。但抗體或其他蛋白中的二硫鍵通常會使得半胱氨酸殘基中的巰基并不暴露在外。所以巰基標記關鍵的一步就是得到暴露在外的可以跟馬來酰亞胺反應的巰基。抗體自身的重鏈和輕鏈就是通過二硫鍵共價交聯在一起的，因此對抗體做巰基標記需要格外小心——即要部分打開重鏈之間的二硫鍵，又不能夠破壞重鏈和輕鏈之間的二硫鍵，以免過分影響其抗原結合的效果。在通過計算還原劑和抗體使用比例達到合適的還原后，跟 NHS 酯的標記反應類似，標記反應液中還需要去除外源的硫醇干擾（常用還原劑多會含有硫醇），因此需要對還原后的抗體進行脫鹽或透析。此外，在馬來酰亞胺反應液中一般還需要加入金屬螯合劑 EDTA，以免其氧化巰基影響實驗。

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