齊岳生物--外泌體制備技術及其儲存方式詳解

西安齊岳生物科技有限公司是集化學科研和定制與一體的高科技化學公司。業務范圍包括化學試劑和產品的研發、生產、銷售等。涉 及產品為通用試劑的分銷、非通用試劑的定制與研發，涵蓋生物科技、精細化學品、醫藥中間體和化工材料等領域。

外泌體制備技術指南：

一、貼壁/懸浮細胞（收集細胞上清，除去細胞或細胞碎片）

（1）貼壁細胞培養誘導結束后，去除培養液;

（2）加入適量的PBS緩沖液沖洗-次,徹底去除FBS;

（3）按每10cm皿(約107細胞) 10m|培養基,換外泌體專用無血清培養基培養至少48hr (細胞融合率

至少70%以上) ;

（4）48hr后，收集細胞上清，并于3000x g離心15min,去除細胞或細胞碎片;

（5）放入-80°C冰箱中保存。

二、提前做好血清或者血漿的分離

（1）全血:通過采血管采集后，經過抗凝處理的全部血液。

（2）血漿:經過抗凝處理的全血，進行低速離心后的上清液，為淡黃色液體。

（3）血清:不經過抗凝處理的血液，讓它自行凝固，在進行低速離心后的上清液，為淡黃色液體。

不同樣本提取的外泌體比照圖：

血漿樣本圖         血漿提取后的外泌體

全血樣本-已溶血狀態       溶血后提取的外泌體

具體全血樣本操作如下:

三、組織液（尿液、腦脊液、外泌體）收集處理

尿液：

（1）收集尿液時，應該盡量選擇受試者的“新鮮”尿液20ml,并注意避免細菌污染,收集前注意對飲食的控制;

（2）并于3000x g離心15min,去除細胞或細胞碎片; .

（3） -80°C冰箱中保存;

（4）填寫樣本登記單,記錄樣本名稱、組織類型、編號、取樣日期、樣本處理過程等情況。

腦脊液：

（1）收集集腦脊液10ml,避免受到血液污染;

（2）并于3000xg離心15min,去除細胞或細胞碎片;

（3）-80°C冰箱中保存;

（4）填寫樣本登記單,記錄樣本名稱、組織類型、編號、取樣日期、樣本處理過程等情況。

外泌體：

（1）收集細胞上清或組織液10ml (血清1ml)，抽提外泌體后，用100μL- 500μLBuffer重懸沉淀(所用buffer根據下游的蛋白分析則用蛋白裂解液，RNA分析則TriZo|裂解) ;

（2）檢測濃度,蛋白濃度2 1ug/ul, RNA濃度250ng/ul;

（3）放入-80°C冰箱中保存。

包裝注意事項：

1.在包裹樣本的鋁箔或冷凍保存管表面，用油性記號筆標明樣本編號及樣本類型。避免被乙醇等有機溶劑抹掉。

2.請用鋁箔或冷凍保存管包裹樣本后再裝入樣本袋中，避免使用紗布、紙張直接包裹樣本。

3.標簽紙請貼于樣本袋繩上，避免貼于容器表面導致脫落造成樣本混亂。

儲存注意事項：

1.樣本采集后,樣本迅速放入進口**凍存管中，擰緊后立即到-80°C中保存。

2.細胞上清樣本處理后儲存于-80°C冰箱中。在20°C冰箱中儲存不宜太久。

3.血液樣本建議使用PAXgene管(BD) 保存。

4. RNA/蛋白樣本儲存于-80°C冰箱中。

運輸方式：干冰與冰袋運輸。

齊岳生物供應產品：

溫馨提示：西安齊岳生物供應產品僅用于科研，不能用于人體。