半抗原藥物偶聯載體蛋白的多種方法綜述！

西安齊岳生物提供將小分子物質（如藥物、半抗原等）或大分子物質（如酶、蛋白毒素）等一共價鍵的方式連接于蛋白分子（（OVA、BSA、HSA），以制備人工抗原酶標抗體等。

小分子半抗原藥物與載體蛋白偶聯效果會受到偶聯物的濃度及其相對比例、偶聯劑的藥物濃度及其相對量、緩沖液成分及其純度和離子強度、pH以及半抗原的穩定性、可溶性和理化特性等因素的影響。通常是在條件溫和的水溶液中將半抗原與載體蛋白共價結合，不宜在高溫、低溫、強堿、強酸條件下進行，一般是由半抗原上的活性基團決定偶聯合成的方法。

簡要介紹下半抗原與載體偶聯方法：

1，帶羧基或者氨基類的化合物，用碳化二亞胺法以及混合酸酐法；

2，含巰基類的化合物，用馬來酰亞胺法；

3，分子結構中帶有氨基類的化合物，戊二醛法，是常用的一種方法。

常用的方法如下:

1.分子中含有羧基或者可羧化的半抗原的偶聯

1)混合酸酐法(也稱氯甲酸異丁酯法)。

半抗原上的羧基在正丁胺存在下與氯甲酸異丁酯反應，形成混合酸酐的中間體，再與蛋白質的氨基反應，形成半抗原與蛋白質的結合物

2)碳二亞胺法(CDI):

碳二亞胺(EDC)使羥基和氨基間脫水形成酰胺鍵，半抗原上的羧基先與EDC反應生成一個中間物，然后再與蛋白質上的氨基反應，形成半抗原與蛋白質的結合物。 如果半抗原分子中不含羧基，可通過某些化學反應引入羧基。在引入羧基后，也可用上述方法進行偶聯。

2.含有氨基或可還原硝基半抗原的偶聯

1 )戊二醛法:

雙功能試劑戊二醛的兩個醛基分別與半抗原和蛋白質上的氨基形成schif 鍵(N=C<,在半抗原和蛋白質間引入一個5碳橋。這一反應條件溫和，可在4~40°C及pH6.0~8.0內進行，操作亦簡便，因此應用廣泛。戊二醛受到光照、溫度和堿性的影響，可能發生自我聚合，減弱其交聯作用，因此經常使用新鮮的戊二醛。

2)重氮化法:

用于活性基團是芳香胺基的半抗原，芳香胺基與NaNO2和HCl反應得到一個重氮鹽，它可直接接到蛋白質酪氨酸羧基的鄰位上，形成一個偶氮化合物。

3. 含羥基半抗原的偶聯

)琥珀酸酐法:

半抗原的羥基與琥珀酸酐在無水吡啶中反應得到一個琥珀酸半酯(帶有羧基的中間體)，再經碳二亞胺法或混合酸酐法與蛋白質氨基結合，在半抗原與蛋白質載體間插入一個琥珀酰基。

2)羰基二咪唑法: N，N'-羰基二咪唑是引入羰基的高活性試劑，在肽合成中表明了是形成**的酰胺鍵試劑。

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