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熒光標記多肽(不同序列號的多肽)
發布時間:2020-09-14     作者:zhn   分享到:

熒光標記多肽(不同序列號的多肽)

西安齊岳生物提供CY系列菁染料CY3、CY5、CY5.5、CY7、CY7.5,ICG,熒光素FITC,Bodipy系列染料,香豆素及雙光子香豆素系列染料,近紅外區域IR系列,ICG系列染料,TO噻唑橙系列染料,


一、什么是熒光標記?

熒光標記所依賴的化合物稱為熒光物質。熒光物質是指具有共軛雙鍵體系化學結構的化合物,受到紫外光或藍紫光照射時,可激發成為激發態,當從激發態恢復基態時,發出熒光。


二、熒光標記的位點

熒光標記物質可以直接和多肽的N端直接相連(如異硫氰酸熒光素的連接, 通常在多肽的N端和異硫氰酸熒光素直接插一個氨基乙酸或者β-丙氨酸。),或者在C端和賴氨酸(或半胱氨酸)的側鏈連接、或者在其它可以連接的位子連接。


三、熒光標記的舉例

1. FITC修飾多肽:
 
異硫氰酸熒光素(FITC)具有比較高的活性,通常來說,在固相合成過程中引入該種熒光基團相對于其他熒光素要更容易,并且反應過程中不需要加入活化試劑。


FITC修飾的多肽通常主要有兩種形式:
(1)在整條肽鏈N端接入FITC,并且在FITC之前接入一分子的Acp(6-氨基己酸),也稱烷基間隔器。反應中FITC與肽鏈上裸露的-NH2反應,Acp的接入提供了六個碳的直鏈空間,大大降低了反應的空間位阻,提高了反應效率,降低了反應難度。其次,FITC還與多肽結構中的-SH,側鏈-NH2反應,Acp的加入也降低了這種副反應發生的可能。此外,多肽在酸性環境條件下切割時,在N端接入FITC的多肽需要經歷環化作用來形成熒光素,這種過程通常都會伴隨一個氨基酸的切除,而烷基間隔器Acp的接入就避免了這一情況的發生。

(2)在整條肽中的某個Lys側鏈接入FITC,Lys側鏈為末端為-NH2的四碳直鏈烷基,直接起到了降低空間位阻的作用。這種修飾方式能夠靈活的在整條肽中任何位置進行FITC修飾,而不僅僅局限于末端。


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2. 香豆素AMC修飾

7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)是一種熒光標記試劑,例如,酶的痕量測定,酶的鑒定,激光染料的制備等多種用途,此外,C端用香豆素修飾的泛素分子也是研究蛋白質泛素化過程的重要探針。

與其他熒光染料不同的是,AMC修飾多肽分子是從C端進行:(1)AMC與肽鏈C端的一個氨基酸反應;(2)固相合成整條肽鏈(從**個氨基酸開始),并且保留整條肽鏈的側鏈保護基和一個氨基保護基;(3)液相縮合AA-AMC與全保護的肽鏈;(4)切除保護基,完成肽鏈的修飾。

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3. 5-FAM修飾

通常用于激光共聚焦顯微鏡和流式細胞技術的運用。

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4. Rhodamine B(羅丹明 B)修飾

羅丹明B是眾多羅丹明染料中的一種,用于熒光測定。

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5. 5-TAMRA 修飾

5-TAMRA是用于標記肽和蛋白質的流行的橙色熒光團之一。

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6. Cy 3和 Cy 5修飾

Cy3 and Cy5 是高消光系數的染料。因此,它們特別適用于細胞內的多肽定位實驗。它們的缺點是在多肽合成的環境中非常的不穩定,因此合成的量相對低。



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