HRP-MAL|辣根過氧化物酶標(biāo)記馬來酰亞胺Maleimide-HRP|馬來酰亞胺活化辣根過氧化物酶標(biāo)記物
別稱:辣根過氧化物酶標(biāo)記馬來酰亞胺
馬來酰亞胺活化辣根過氧化物酶標(biāo)記物(Maleimide-HRP)
馬來酰亞胺活化辣根過氧化物酶標(biāo)記物(Maleimide-HRP)
描述:
HRP是一種分子量達(dá)44000的糖蛋白,由無色的酶蛋白和深棕色的鐵卟啉結(jié)合而成,中性糖和氨基糖約占18%,主要有甘露糖、木糖、阿拉伯糖和己糖胺等。每一個HRP分子中含一個氯化血紅素IX作輔基,該輔基在403nm波長處有較大吸收峰,而去輔基的酶蛋白在275nm波長處有較大吸收。
HRP在403nm的OD值與275nm的OD值之比,也就是所謂的RZ(Reinheits Zahl)值。RZ值僅說明血紅素基團(tuán)在HRP中的含量,并非表示HRP制劑的真正純度,而且RZ值高的HRP制劑,并不意味著酶活性也高。
但可以一純酶溶液在10mm光徑403nm波長下的吸光度來計算酶濃度[1%(W/V)酶溶液吸光度為22.5,濃度為227umol/L]。純HRP干燥貯存于–20oC可保持穩(wěn)定,使用1.36 mol/L甘油、10mmol/L磷酸鈉、30umol/L牛血清白蛋白和20umol/L細(xì)胞色素C(pH 7.4)溶液作為基質(zhì)冷凍保存,可使酶結(jié)合物穩(wěn)定數(shù)年。
HRP對熱及有機溶劑的作用比較穩(wěn)定,用甲苯與石蠟切片處理或用純乙醇或l0%甲醛水溶液固定做冷凍切片,均不能使其活性改變。氰化物或硫化物在10–5~10–6mol/L濃度時具有可逆性地**HRP的作用;氟化物、疊氮化合物或羥胺僅在高于10-3mol/L濃度時**HRP;HRP還可被羥甲基過氧化氫不可逆地**。
強酸也是HRP的強烈的**劑。因此,在酶免疫測定常選用上述的某些化合物如氟化鈉、疊氮鈉和強酸等作為酶反應(yīng)的終止劑。此外,在配制酶免疫測定的稀釋緩沖液時,為防止酶失活,應(yīng)避免使用疊氮鈉作防腐劑。
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