普魯士藍(lán)染色液的三種染色方法及注意事項(xiàng)
普魯士藍(lán)反應(yīng)(Prussianblue reaction)又稱為含鐵血黃素染色,即經(jīng)過亞鐵化鉀和稀酸處理后可以產(chǎn)生藍(lán)色,常見于吞噬細(xì)胞或間質(zhì)內(nèi),生成一種不溶解的藍(lán)色化合物即三 價(jià)鐵的亞鐵化物。普魯士藍(lán)染色液主要用于顯示細(xì)胞中鐵離子,常見于吞噬細(xì)胞內(nèi),可以很好地區(qū)分含鐵血黃素與其他色素。該染色液穩(wěn)定性好、可以長期保存、不易產(chǎn)生沉淀、應(yīng)用范圍廣, 可以進(jìn)行復(fù)染。
普魯士藍(lán)細(xì)胞染色
自備材料:
1、固定液:10%中性福爾馬林、4%多聚甲醛等。
2、系列乙醇
普魯士藍(lán)三種染色種類及制備方法
染色種類 | 制備方法 |
石蠟切片染色 | 1、組織固定于10%中性福爾馬林,常規(guī)脫水包埋。 |
冰凍切片染色 | 1、無需脫蠟,直接迅速用蒸餾水沖洗2~3min。 |
細(xì)胞染色 | 1、4%多聚甲醛固定10~20min。 |
普魯士藍(lán)染色注意事項(xiàng):
1、切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。組織固定常采用10%中性福爾馬林,經(jīng)普通福爾馬林長期固定后,組織會有損傷。避免使用酸性固定劑,鉻酸鹽處理也會妨礙鐵的保存。
2、整個(gè)操作過程中容器要干凈,避免用金屬鐵制品,洗切片和容器時(shí)以蒸餾水為宜,因普通水內(nèi)含鐵質(zhì)。Perls stain 染色時(shí),應(yīng)根據(jù)樣本情況調(diào)整著色時(shí)間。
3、所有切片都應(yīng)使用同一個(gè)陽性對照切片,選擇適合的對照非常重要。尸檢肺組織是一個(gè)很好的對照,包含相當(dāng)數(shù)量的鐵陽性巨噬細(xì)胞(心衰細(xì)胞)。
4、冰凍切片和細(xì)胞染色,根據(jù)具體情況摸索實(shí)驗(yàn)條件。
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