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普魯士藍(lán)染色液的三種染色方法及注意事項(xiàng)
發(fā)布時(shí)間:2020-07-22     作者:axc   分享到:

普魯士藍(lán)染色液的三種染色方法及注意事項(xiàng)

普魯士藍(lán)反應(yīng)(Prussianblue reaction)又稱為含鐵血黃素染色,即經(jīng)過亞鐵化鉀和稀酸處理后可以產(chǎn)生藍(lán)色,常見于吞噬細(xì)胞或間質(zhì)內(nèi),生成一種不溶解的藍(lán)色化合物即三 價(jià)鐵的亞鐵化物。普魯士藍(lán)染色液主要用于顯示細(xì)胞中鐵離子,常見于吞噬細(xì)胞內(nèi),可以很好地區(qū)分含鐵血黃素與其他色素。該染色液穩(wěn)定性好、可以長期保存、不易產(chǎn)生沉淀、應(yīng)用范圍廣, 可以進(jìn)行復(fù)染。

普魯士藍(lán)染色液的三種染色方法及注意事項(xiàng) 

普魯士藍(lán)細(xì)胞染色

自備材料:

1、固定液:10%中性福爾馬林、4%多聚甲醛等。

2、系列乙醇

普魯士藍(lán)三種染色種類及制備方法

染色種類

制備方法

石蠟切片染色

1、組織固定于10%中性福爾馬林,常規(guī)脫水包埋。
2、切片厚度4μm,常規(guī)脫蠟至水。
3、蒸餾水水洗 1min。
4、切片入Perls stain(見注意事項(xiàng)2),浸染15~30min。
5、蒸餾水充分沖洗2~5min。
6、入核固紅染色液,淡染細(xì)胞核5~10min。
7、自來水沖洗1~5s。
8、常規(guī)脫水透明,中性樹膠封固

冰凍切片染色

1、無需脫蠟,直接迅速用蒸餾水沖洗2~3min。
2、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟,時(shí)間可以相應(yīng)縮短。

細(xì)胞染色

1、4%多聚甲醛固定10~20min。
2、自來水沖洗2次,每次2min。
3、蒸餾水沖洗2次,每次2min。
4、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟,時(shí)間可以相應(yīng)縮短

普魯士藍(lán)染色注意事項(xiàng):

1、切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。組織固定常采用10%中性福爾馬林,經(jīng)普通福爾馬林長期固定后,組織會有損傷。避免使用酸性固定劑,鉻酸鹽處理也會妨礙鐵的保存。

2、整個(gè)操作過程中容器要干凈,避免用金屬鐵制品,洗切片和容器時(shí)以蒸餾水為宜,因普通水內(nèi)含鐵質(zhì)。Perls stain 染色時(shí),應(yīng)根據(jù)樣本情況調(diào)整著色時(shí)間。

3、所有切片都應(yīng)使用同一個(gè)陽性對照切片,選擇適合的對照非常重要。尸檢肺組織是一個(gè)很好的對照,包含相當(dāng)數(shù)量的鐵陽性巨噬細(xì)胞(心衰細(xì)胞)

4、冰凍切片和細(xì)胞染色,根據(jù)具體情況摸索實(shí)驗(yàn)條件。

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