多功能SiO2@PS聚苯乙烯核/硅殼微球珠基復合材料
微球分析通常建立在聚苯乙烯顆粒上。該聚合物載體可用有機染料編碼,具有理想的低密度、高折射率等材料特性,可用于細胞檢測。然而,官能團通常在聚合過程中集成,隨后的修飾僅限于這些基團的反應性。此外,聚苯乙烯作為核心材料,即使在功能化后,珠子表面仍然存在許多疏水區域,使得粒子在使用過程中容易發生非特異性吸附。后者需要幾個洗滌步驟,并在(生物)分析分析中使用添加劑。在這篇文章中,展示了如何通過使用單分散聚苯乙烯核/二氧化硅外殼粒子(SiO2@PS)來克服這些限制。將兩種不同疏水的BODIPY(硼二吡咯亞甲基)染料以不同濃度包裹在聚乙烯吡咯烷酮(PVP)穩定的聚苯乙烯核中,在流式細胞儀的兩個獨立的檢測通道中形成5股陣列。隨后用等摩爾APTES/PEG(氨基丙基三乙氧基硅烷/聚乙二醇硅烷)共混物對二氧化硅殼進行改性,只需一步就能為雜化核殼微球增加多功能特性。
檢測原理
使用染料編碼的微球和間接信號產生的CS顆粒分析的原理:(1)混合和孵育;(2)流式細胞術讀取和解碼微球。
APTES為咖啡因衍生物(作為半抗原)提供了附著的氨基,從而創建了抗原偶聯微球;PEG部分**地**了抗體的非特異性結合,使表面具有防污性能。這是一種簡單的、免洗的、潛在的多重免疫化學檢測方法。信號的產生依賴于攜帶CAFH的CS微珠和樣本中的分析物之間的競爭反應,以獲得各自的一次抗體(Pab)。因為采用了間接分析的形式,所以添加了染料標記的二抗(SAB),它與珠子上的PAb結合。所有試劑混合在一個隔間中,不需要額外的洗滌步驟,并產生競爭性的分析反應。使用流式細胞術進行信號讀出,可以從本質上區分珠相關熒光與背景信號,即從未結合的標記SAB中區分出來。以此方式,無需洗滌即可檢測分析響應,因為**地**了蛋白質(例如初級或檢測抗體)與攜帶APTES/PEG的設計微珠表面的非特異性結合。
實驗結果
圖1 在相應的解碼通道中用于功能化的綠色編碼(a,b)和紅色編碼(c,d)CS珠的門控和彩色直方圖和散點圖
用二氧化硅包裹摻雜的PS核心粒子沒有不良影響,綠色編碼的5-plex CS粒子陣列可以用流式細胞儀檢測到。在熒光直方圖(FL1-H和FL4-H)以及FL1-H和FSC-H之間的相關圖中,所有粒子群都可以很好地分辨出來。
圖2 G2/R2核(包覆前)和G2/R2-CS(包覆后)粒子的熒光光譜。
總的光譜特征,如帶寬和主要譜帶形狀沒有改變,表明染料在高度堿性條件下的二氧化硅包覆過程中保持完好。
圖3 粒子活化(1)在甲醇/鹽酸中的示意圖,僅用一元APTES的官能化(2a),以及二元APTES/PEG共混物(2b)和CAFH的偶聯(3)。
將APTES(一元表面作為對照,CS1)或等摩爾APTES/PEGS共混物(二元表面,CS2)簡單地添加到不同溶劑中的預活化CS小球中進行功能化,而不需要任何額外的催化劑。在隨后的步驟中,對粒子CS1和CS2執行類似的CAFH耦合,產生CS1-CAFH和CS2-CAFH。
圖4 (A)四種不同免疫化學反應的顏色代碼。(B)不同反應條件下CS0、CS1和CS2功能化后的細胞計數測定結果。
在SC1中,存在明顯的非特異性吸附,SC2是在乙醇體系中制備的,在乙醇反應體系中無非特性吸附,而在水中存在非特異吸附,可能是由于在水溶液中,對于CS1/CS2-水,由于質子化的氨基和帶負電的硅醇表面之間的靜電相互作用,APTES往往形成單分子層。66因此,表面的屏蔽可能會防止活性較低的**硅烷(如氨基直接附近的PEG)的縮合。此外,水中氨基的部分質子化會**其對相鄰硅烷縮合反應的催化作用。相反,PEG可能優先凝聚在額外的多層位點或島嶼上,從而使氨基的總數基本保持不變。因此,PEG鏈可能不均勻分布,從而不能在表面均勻展開其防污性能。另一方面,對于在乙醇中官能化的CS2粒子,結果表明非特異性結合被**。
實際應用
以咖啡因為模型分析物測試分析性能。先,將CAFH共軛的CS2粒子(G3,R3)與其他四個非共軛的CS粒子混合,從叢集合中生成校準曲線。作為免洗滌檢測實際樣品中小分子的概念證明,在三種不同的飲料(樣品1,Maya Mate;樣品2,Club Mate;和樣品3;Club Mate IceTea)中測量了CAF的含量。在將飲料在mILI-Q水中稀釋1:20000后,無需洗滌步驟即可進行分析,結果如下圖所示。表S5提供的數據表明,可以測定CaF的含量,平均回收率為98±31%,范圍為68?146%,這對于一種簡單、免洗的分析方法是很好的。
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羧基聚苯乙烯熒光微球 紅色 橙色 綠色
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