RGD-全氟化碳納米乳MRI顯影劑的制備步驟

納米乳作為一種新型的納米材料，具有良好的生物相容性、細(xì)胞跨膜運(yùn)輸能力，可應(yīng)用于**的診斷以及作為**載體。全氟化碳(PFCs)納米乳作為19F MRI示蹤劑已經(jīng)被廣泛應(yīng)用。全氟溴辛烷(PFOB)是一種無(wú)毒性的PFCs，可提供較強(qiáng)的F信號(hào)，更是被廣泛應(yīng)用于檢測(cè)**細(xì)胞、組織以及對(duì)活體**的19F MRI成像。另外，PFOB對(duì)Xe具有較好的溶解性，氙氣是一種理想的介質(zhì)，因?yàn)樗且环N惰性，無(wú)毒的氣體，在人體內(nèi)沒(méi)有背景信號(hào)。129Xe的天然豐度為26.4％，可通過(guò)自制的極化裝置產(chǎn)生超極化129Xe氣體。將超極化的129Xe與CEST技術(shù)相結(jié)合可達(dá)到超高的靈敏度，較低可在皮摩爾濃度下檢測(cè)到129Xe造影劑。使用全氟溴辛烷(PFOB)作為129Xe的載體，它具有生物相容性好、無(wú)毒、體內(nèi)代謝快等優(yōu)點(diǎn)，PFOB納米乳作為129Xe/19F雙通道多功能顯影劑，具有超高的靈敏度用于129Xe MRI以及19F MRI成像。制備方法簡(jiǎn)單、材料易得有較好的生物相容性，可以應(yīng)用于生物體內(nèi)的核磁共振成像。

本文在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，目的是在于提供一種RGD-全氟化碳納米乳MRI顯影劑及其制備方法和應(yīng)用；本文提供的PFOB納米乳結(jié)合了129Xe MRI和19F MRI兩種磁共振成像方法，并且引用RGD配體與**細(xì)胞上的受體特異性結(jié)合的靶向診斷的策略，使納米乳選擇性的識(shí)別**細(xì)胞。通過(guò)129Xe MRI和19F MRI技術(shù)實(shí)現(xiàn)對(duì)肺****的靶向診斷。該顯影劑有超高靈敏度以及較好的生物相容性。該納米乳制備方法簡(jiǎn)單，原料便宜易得，適合用于體內(nèi)磁共振成像。

包括如下步驟：

(1)納米乳的制備：先將占磷酸鹽緩沖液4wt％的磷脂和占磷酸鹽緩沖液0.5wt％的普朗尼克F-68溶解在1ml磷酸鹽緩沖液(PBS)中，然后將占磷酸鹽緩沖液10wt％-20wt％的全氟溴辛烷(PFOB)加入到上述緩沖液中，并在超聲儀中處理5-10分鐘，再用試管振蕩器振蕩10-15分鐘，得粗乳液；之后將制備的粗乳液用去離子水稀釋20倍，再通過(guò)微孔濾膜擠制2次，得到納米乳記為NPs；

(2)RGD-納米乳的制備：將膽固醇-PEG2000-RGD加入到步驟(1)制備的納米乳液中，然后置于搖床上以300rpm的速度振蕩1小時(shí)得到靶向納米乳NPs-RGD；

(3)熒光標(biāo)記的RGD納米乳的制備：向步驟(2)制備的靶向納米乳中加入濃度為5mg/mL的熒光染料DiI，然后置于搖床上以300rpm的速度振蕩1小時(shí)，得到DiI標(biāo)記的RGD-納米乳。

優(yōu)選的，所述膽固醇-PEG2000-RGD的制備方法為：將膽固醇-PEG2000-Mal與RGDyc按摩爾比10:1-1:1加入1ml PBS中，室溫下置于搖床上以300rpm的速度振蕩20-24小時(shí)，然后用透析袋在超純水中透析去除未反應(yīng)的RGDyc分子，經(jīng)冷凍干燥機(jī)凍干得到靶向分子膽固醇-PEG2000-RGD。

優(yōu)選的，所述磷脂為大豆卵磷脂(Lipoid S75)。

優(yōu)選的，所述磷酸鹽緩沖液的濃度為5mM，pH為7.4。

優(yōu)選的，所述微孔濾膜的孔徑為0.22μm。

優(yōu)選的，所述膽固醇-PEG2000-RGD的加入量與磷脂的摩爾比為1：20。

優(yōu)選的，步驟(1)中磷脂與F-68的質(zhì)量比為8：1。

優(yōu)選的，所述磷脂與全氟溴辛烷(PFOB)的質(zhì)量比為1:2.5-1:5。

另外，本文還要求保護(hù)由所述方法制備得到的RGD-全氟化碳納米乳MRI顯影劑以及該顯影劑應(yīng)用于肺****的早期MRI診斷。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本文具有以下的明顯有益效果：

(1)本文使用S75磷脂做膜材料，用膽固醇-PEG2000-RGD分子進(jìn)行修飾，采用超聲和振蕩的方法制備納米乳，其中F-68的添加可以使微乳結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定，材料便宜易得，制備方法簡(jiǎn)單并具有良好的生物相容性；

(2)本文制備的納米乳同時(shí)作為129Xe MRI和19F MRI顯影劑以及光學(xué)成像顯影劑，是一種129Xe/19F雙通道、雙模態(tài)MRI顯影劑；

(3)作為129Xe Hyper CEST顯影劑，本文納米乳具有超高的靈敏度高，可在皮摩爾濃度下對(duì)肺**細(xì)胞進(jìn)行MRI成像。通過(guò)129Xe MRI和19F MRI以及光學(xué)成像證明了該納米乳對(duì)肺****具有較好的靶向性，該顯影劑可以應(yīng)用于肺****的早期MRI診斷。

產(chǎn)品供應(yīng)：

右旋糖酐-二乙烯三胺五乙酸-釓離子螯合物

Dextran-DTPA-Gd顯影劑

Gd-EOB-DTPA顯影劑

氧化鐵微顆粒(MPIOs)MRI顯影劑

活化PⅡb/Ⅲa配體MRI顯影劑

肝素標(biāo)記超順磁氧化鐵粒子(HepSPIO)

葡聚糖包裹的超順磁性Fe3O4納米顆

稀土化合物核磁共振成像(MRI)

樹(shù)狀大分子CT/MRI雙模態(tài)成像造影劑

錳螯合物磁共振成像(MRI)

兩親性**靶向性MRI造影劑中間體

Mn3O4/mSiO2納米粒子MRI造影劑

含有鄰二酚羥基的類(lèi)EDTA配體和非釓磁共振造影劑

非釓順磁性金屬配合物磁共振造影劑

非釓金屬簇集體磁共振造影劑

Gd(Ⅲ)Mn(Ⅱ)配合物磁共振成像造影劑

MRI順磁性造影劑Gd-DTPA

含硝基咪唑基的水溶性磁共振成像造影劑

含金屬兩親配合物的順磁性固體脂質(zhì)納米顆粒(pSLN)

含D-半乳糖基的順磁性金屬配合物磁共振成像造影劑

肝靶向性磁共振成像造影劑

高分子/磁性納米顆粒復(fù)合微囊—聲/磁雙重顯影劑

(SPIO)超順磁性氧化鐵顯影劑

T1顯影劑釓螯合物GD-DTPA

Hab18-SPIO磁共振造影劑

靶向人肝細(xì)胞肝**表面抗原Hab18g

T2核磁共振影像MRI

含有超順磁性氧化鐵奈米粒子rABL

熒光金納米簇磁共振和熒光成像造影劑

標(biāo)記乳糖基白蛋白SPIO磁共振肝細(xì)胞受體顯影劑

標(biāo)記乳糖基白蛋白的超順磁性氧化鐵粒子(LAC-HSA-SPIO)

氧化鐵基順磁性/偽順磁性納米顆粒MRI T1顯影劑

含磺胺基的順磁性金屬配合物磁共振成象造影劑

6-(1,3-二氧代異吲哚啉)己酸磁性納米粒子核磁共振成像

含硝基咪唑的Gd(Ⅲ)/99mTc(Ⅴ)配合物造影劑

含天門(mén)冬氨酸-葡聚糖的順磁性金屬配合物磁共振成像造影劑

包含CEST活性的順磁性配合物MRI造影劑

順磁性聚膦腈納米管磁共振造影劑

順磁性聚膦腈納米管Gd-PZSNTMRI造影劑

順磁性磁共振造影劑禮-二乙烯二胺五乙酸(Gd-DTPA

超順磁性氧化鐵/Gd-DTPA

含釓(Gadolinium)顯影劑

順磁性金屬配合物磁共振成像造影劑

新型靶向液態(tài)氟碳納米乳超聲造影劑

眼底熒光血管造影

載吲哚菁綠超聲微泡造影劑/ICG-PLGA

釓的螯合物磁共振造影

釓雙胺磁共振造影

歐乃影磁共振造影

釓塞酸二鈉磁共振造影

普美顯磁共振造影

釓貝葡胺磁共振造影

莫迪司磁共振造影

線性造影劑

大環(huán)類(lèi)造影劑

離子型造影劑

非離子型造影劑

PEG-PAMAMs修飾谷氨酸綴合的Fe3O4納米顆粒

β-環(huán)糊精/聚氨酯復(fù)合材料

FR-HCPT-PNPCA喜樹(shù)堿前藥

半乳糖多聚賴(lài)氨酸(Gal-PLL)

USPIOswithFunctionalizedSurfaces造影劑

T1/T2造影劑脂質(zhì)體定制服務(wù)

Gd磁共振釓T1造影劑脂質(zhì)體

14:0PE-DTPA(Gd)，磷脂偶聯(lián)釓

DSPE-DTPA-Gd-DSPE造影劑

DPPE-DTPA-Gd-DPPE造影劑

DMPE-DTPA-Gd-DMPE造影劑

Silica-coatedGd(DOTA)，釓修飾二氧化硅

HA-DOTA-Gd，透明質(zhì)酸修飾釓造影劑

Biotin-Gd-DOTA，生物素修飾的釓

DOTA-Gd-peptide，釓修飾多肽

pDHPMA-Cy5.5-DOTA-Gd

PAMAM-PEG-DOTA-Gd；樹(shù)枝狀釓化合物

DMPE-DTPA-Gd

Gd-DOTA-PLGA造影劑

Gd-p-SCN-Bn-DOTA，釓-大環(huán)配體

Gd-BSA-FITC，釓-牛血清白蛋白-綠色熒光素

Gd-BSA，釓-牛血清白蛋白

Gd-DTPA/Gado-DTPA造影劑

FA-PEG-PAMAM-Cur葉酸接枝姜黃素PAMAM樹(shù)枝狀大分子

靶向大分子造影劑(FA-PEG-PAMAM-Gds)

RGD多肽修飾二氧化硅納米粒

肽-DOTA探針?lè)肿?/span>DOTA-EM7

PEG修飾重組腺病毒PLGA超聲造影劑

熒光標(biāo)記介孔二氧化硅磁顆粒（FITC-SiO2@Fe3O4）mesoporoussilica/Fe3O4Magneticnanoparticles,FITCfunction

CarboxylicFunctionalMesoporousSio2microspheres（50nm）羧基化介孔二氧化硅微球

大孔徑介孔二氧化硅納米粒子Mesoporoussilicamicrosphereswithlargeporesize

包裹四氧化三鐵T2造影劑脂質(zhì)體定制

磁共振釓T1造影型脂質(zhì)體定制

超小氧化釓點(diǎn)綴的介孔二氧化硅

四苯基乙烯-2釓(TPE-2Gd)

上述產(chǎn)品齊岳生物均可供應(yīng)，僅用于科研，不可用于人體實(shí)驗(yàn)！

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