牛乳過敏是一種常見的食物過敏反應。在導致牛乳過敏反應的蛋白中，β-乳球蛋白（β-LG）被認為是主要的過敏原。采用共價修飾技術降低β-LG抗原性已成為國際乳制品加工技術研究的。但常用共價修飾手段如糖基化、磷酸化等隨機修飾，存在修飾位點選擇性低、穩定性不理想、修飾產物不均一等問題。研究表明β-LG抗原性同時受線性表位和構象表位影響，共價修飾發生在不同位點會對蛋白構象及抗原性產生不同影響。為明晰不同位點共價修飾對β-LG抗原性的影響，實現共價修飾對β-LG抗原性的調控，需采用定點修飾技術以制備均一化修飾產物。

在PEG蛋白修飾常用基團中，巰基因其含量少成為PEG定點修飾中的理想位點，目前針對β-LG巰基使用PEG定點修飾的鮮見報道。并且β-LG第121位半胱氨酸（Cys121）游離巰基位于被97%人血清識別的主要抗原表位肽段AA102-124中，游離巰基或是探究不同結合位點對β-LG抗原性影響及實現β-LG致抗原性調控的關鍵位點。

因此，針對β-LG Cys121游離巰基，選擇5 kDa單甲氧基聚乙二醇-馬來酰亞胺（mPEG-MAL）對其進行定點修飾（圖1），以期獲得高修飾率β-LG PEG定點修飾產物，并對修飾前后β-LG抗原性進行探究。

修飾前后β-LG抗原性分析

研究顯示PEG修飾能降低蛋白免疫原性，然而本實驗經mPEG-MAL對β-LG Cys121游離巰基定點修飾后，β-LG-MAL抗原性**提高約25.9%，如圖2所示。本團隊前期采用PEG定點修飾β-LG谷氨酰胺殘基得到產物β-LG-NH2，β-LG-NH2抗原性**下降59.04%；對β-LG的N-末端氨基進行修飾得到β-LG-ALD，β-LG-ALD抗原性**下降53.8%，該2 種位點修飾使蛋白抗原性下降原因都歸結于PEG鏈對于蛋白的空間屏蔽作用，掩蓋了β-LG表面部分抗原決定簇。

圖2

本實驗中，PEG的巰基定點修飾卻沒有因PEG鏈的屏蔽使抗原性下降，說明結合位點對β-LG抗原性的影響較PEG鏈的屏蔽作用更為**。β-LG中肽段AA41-46、AA102-124和AA149-163為主要抗原表位，分別為92%、97%、89%的人血清識別。實驗中Cys121游離巰基位于被97%人血清識別的主要抗原表位肽段AA102-124中，并且由于β-LG致敏性同時受線性表位和構象表位影響，因此可能是修飾后原處于蛋白內部的致敏位點暴露，或者有新的構象致敏表位形成導致β-LG致抗原性**提升。

齊岳生物擁有種類齊全的PEG衍生物，包括：NHS-PEG，馬來酰亞胺PEG，巰基PEG，氨基PEG，疊氮PEG，DSPE PEG，熒光PEG等。為全世界數以百萬計的客戶提供產品與服務。修飾性PEG可應用于**輸送、醫療設備改造和診斷分析等領域。Nanocs提供從磷脂PEGs到熒光PEGs的多種選擇，種類齊全，產品線豐富。

羥基-聚乙二醇-乙酸OH-PEG-AA

烯基-聚乙二醇-羥基ALKENE-PEG-OH

羥基-聚乙二醇-聚酰亞胺OH-PEG-PI

羥基-聚乙二醇-聚己內酯OH-PEG-PCL

羥基-聚乙二醇-琥珀酸OH-PEG-SA

芴甲氧羰酰基-亞氨基-聚乙二醇-羥基 Fmoc-NH-PEG-OH

叔丁氧羰基-亞氨基-聚乙二醇-羥基Boc-NH-PEG-OH

單硬脂酸-聚乙二醇-羥基STA-PEG-OH

磷脂(鈉鹽)-聚乙二醇-羥基DSPE(Sodium salt)-PEG-OH

膽固醇-聚乙二醇-羥基CLS-PEG-OH

二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羥基DSPE-PEG-OH

羥基-聚乙二醇-熒光素OH-PEG-FAM

羅丹明B-聚乙二醇-羥基RB-PEG-OH

熒光素-聚乙二醇-羥基FITC-PEG-OH

羥基-聚乙二醇-乙酸+C30成酯OH-PEG-AA-C30

硅烷-聚乙二醇-酰肼Silane-PEG-HZ

丙烯酸酯-聚乙二醇-酰肼AC-PEG-HZ

硫辛酸-聚乙二醇-酰肼LA-PEG-HZ

對甲苯磺酸基-聚乙二醇-酰肼Tosylate-PEG-HZ

乙酰硫基-聚乙二醇-酰肼Acetylthio-PEG-HZ

氨基氧基-聚乙二醇-酰肼Aminooxy-PEG-HZ

硝基苯基碳酸酯-聚乙二醇-酰肼NPC-PEG-HZ

琥珀酰亞胺酰胺琥珀酸-聚乙二醇-酰肼SAS-PEG-HZ

琥珀酰亞胺碳酸酯-聚乙二醇-酰肼SC-PEG-HZ

琥珀酰亞胺乙酸酯-聚乙二醇-酰肼SCM-PEG-HZ

琥珀酰亞胺戊二酸酯-聚乙二醇-酰肼SG-PEG-HZ

琥珀酰亞胺琥珀酯-聚乙二醇-酰肼SS-PEG-HZ

琥珀酰亞胺戊酸酯-聚乙二醇-酰肼SVA-PEG-HZ

環氧化物-聚乙二醇-酰肼Epoxides-PEG-HZ

戊酸-聚乙二醇-酰肼VA-PEG-HZ

丙烯酰胺-聚乙二醇-酰肼Acrylamide-PEG-HZ

溴化物-聚乙二醇-酰肼Br-PEG-HZ

乙烯磺酸酯-聚乙二醇-酰肼VS-PEG-HZ

甲基丙烯酸酯-聚乙二醇-酰肼Me-PEG-HZ

碘代乙酰基-聚乙二醇-酰肼IA-PEG-HZ

氯化物-聚乙二醇-酰肼Chloride-PEG-HZ

二苯基環辛炔-聚乙二醇-酰肼DBCO-PEG-HZ

反式環辛烯-聚乙二醇-酰肼TCO-PEG-HZ

四嗪-聚乙二醇-酰肼Tetrazine-PEG-HZ

葉酸-聚乙二醇--酰肼Folate-PEG-HZ

膽固醇酯-聚乙二醇--酰肼CHEMS-PEG-HZ

巰基-聚乙二醇-酰肼SH-PEG-HZ

叔丁氧羰基氨基-聚乙二醇-醛基Boc-NH-PEG-CHO

聚己內酯-聚乙二醇-醛基PCL-PEG-CHO

醛基-聚乙二醇-琥珀酰亞胺酯基CHO-PEG-SC

碘乙酰基-聚乙二醇-硫辛酸IA-PEG-Lipoic acid

氯化物-聚乙二醇-硫辛酸Chloride-PEG-Lipoic acid

氮雜二苯并環辛炔-聚乙二醇-硫辛酸DBCO-PEG-Lipoic acid

環辛烯-聚乙二醇-硫辛酸TCO-PEG-Lipoic acid

四嗪-聚乙二醇-硫辛酸Tetrazine-PEG-Lipoic acid

膽固醇酯-聚乙二醇-硫辛酸CHEMS-PEG-Lipoic acid

羧基-聚乙二醇-羥基COOH-PEG-OH

活性酯-聚乙二醇-羥基NHS-PEG-OH

炔基-聚乙二醇-羥基AlKyne-PEG-OH

巰基-聚乙二醇-羥基HS-PEG-OH

生物素-聚乙二醇-羥基Biotin-PEG-OH

酰肼-聚乙二醇-羥基HZ-PEG-OH

硅烷-聚乙二醇-羥基Silane-PEG-OH

丙烯酸酯基-聚乙二醇-羥基AC-PEG-OH

硫辛酰胺-聚乙二醇--羥基LA-PEG-OH

對甲苯磺酸-聚乙二醇-羥基Tosylate-PEG-OH

乙酰硫基-聚乙二醇-羥基Acetylthio-PEG-OH

氨基氧基-聚乙二醇-羥基Aminooxy-PEG-OH

硝基苯基碳酸酯-聚乙二醇-羥基NPC-PEG-OH

琥珀酰亞胺酰胺琥珀酸-聚乙二醇-羥基SAS-PEG-OH

羥基-聚乙二醇-琥珀酰亞胺羧甲基酯OH-PEG-SCM

琥珀酰亞胺戊酸酯-聚乙二醇-羥基SVA-PEG-OH

環氧化物-聚乙二醇-羥基Epoxides-PEG-OH

戊酸-聚乙二醇-羥基Valeric Acids-PEG-OH

丙烯酰胺-聚乙二醇-羥基ACA-PEG-OH

溴基-聚乙二醇-羥基Br-PEG-OH

乙烯砜-聚乙二醇-羥基VS-PEG-OH

甲基丙烯酸酯基-聚乙二醇-羥基MA-PEG-OH

碘酸鹽-聚乙二醇-羥基IA-PEG-OH

氯化物-聚乙二醇-羥基Chloride-PEG-OH

氮雜二苯并環辛炔-聚乙二醇-羥基DBCO-PEG-OH

環辛烯-聚乙二醇-羥基TCO-PEG-OH

四嗪-聚乙二醇-羥基Tetrazine-PEG-OH

葉酸-聚乙二醇-羥基FA-PEG-OH

膽固醇酯-聚乙二醇-羥基CHEMS-PEG-OH

甲氧基聚乙二醇-羥基mPEG-OH

羥基-聚乙二醇-乙酸叔丁酯OH-PEG-CH2COOtBu

乙酰基巰基-聚乙二醇-羥基S-Acetyl-PEG-OH

多巴胺-聚乙二醇-羥基DA-PEG-OH

聚賴氨酸-聚乙二醇-羥基PLL-PEG-OH

聚(乳酸-共-乙醇酸)-聚乙二醇-羥基PLGA(10K)-PEG-OH

羥基-聚乙二醇-丙酸OH-PEG-PA

N-(3-羥丙基)酞亞胺-聚乙二醇-羥基N-(3-hydroxypropyl) phthalimide-PEG-OH

芐基-聚乙二醇-羥基Benzyl-PEG-OH

6-硝基多巴胺-聚乙二醇-羥基6-NO2DA-PEG-OH

膽固醇-聚乙二醇-有機硅CLS-PEG-Silane

二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-硅烷DSPE-PEG-Silane

熒光素-聚乙二醇-三乙氧基硅烷FITC-PEG-Silane

氮雜二苯并環辛炔-聚乙二醇-丙烯酸酯DBCO-PEG-AC

縮水甘油基-聚乙二醇-丙烯酸酯基AC-PEG-EPO

丙烯酸酯基-聚乙二醇-甲基丙烯酸酯基AC-PEG-MA

丙烯酸酯-聚乙二醇-精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸AC-PEG-RGD

丙烯酸酯基-聚乙二醇-疊氮基AC-PEG-N3

二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-丙烯酸酯DSPE-PEG-AC

熒光素-聚乙二醇-丙烯酸酯FITC-PEG-AC

膽固醇酯-聚乙二醇-丙烯酸酯CHEMS-PEG-AC

硫辛酸-聚乙二醇-丙烯酸酯Lipoic acid-PEG-Acrylates

對甲苯磺酸-聚乙二醇-丙烯酸酯Tosylate-PEG-Acrylates

乙酰巰基-聚乙二醇-丙烯酸酯Acetylthio-PEG-Acrylates

氨氧基-聚乙二醇-丙烯酸酯Aminooxy-PEG-Acrylates

硝基苯基碳酸酯-聚乙二醇-丙烯酸酯NPC-PEG-Acrylates

琥珀酰亞胺酰胺琥珀酸-聚乙二醇-丙烯酸酯SAS-PEG-Acrylates

戊酸-聚乙二醇-丙烯酸酯Valeric Acids-PEG-Acrylates

丙烯酰胺-聚乙二醇-丙烯酸酯Acrylamide-PEG-Acrylates

溴基 -聚乙二醇-丙烯酸酯Bromide-PEG-Acrylates

乙烯磺酸酯-聚乙二醇-丙烯酸酯VS-PEG-Acrylates

碘代乙酰基-聚乙二醇-丙烯酸酯IA-PEG-Acrylates

氯化物-聚乙二醇-丙烯酸酯Chloride-PEG-Acrylates

反式環辛烯-聚乙二醇-丙烯酸酯TCO-PEG-Acrylates

四嗪-聚乙二醇-丙烯酸酯Tetrazine-PEG-Acrylates

葉酸-聚乙二醇-丙烯酸酯Folate-PEG-Acrylates

葉酸-聚乙二醇-硫辛酸FA-PEG-LA

琥珀酰亞胺戊二酸酯-聚乙二醇-硫辛酸SG-PEG-Lipoic acid

琥珀酰亞胺琥珀酯-聚乙二醇-硫辛酸SS-PEG-Lipoic acid

琥珀酰亞胺乙酸酯-聚乙二醇-硫辛酸SCM-PEG-LA

琥珀酰亞胺碳酸酯基-聚乙二醇-硫辛酸SC-PEG-Lipoic acid

熒光素-聚乙二醇-硫辛酸FITC-PEG-LA

硫辛酸-聚乙二醇-三甲基溴化銨LA-PEG-NMe3+Br-

對甲苯磺酸-聚乙二醇-硫辛酸Tosylate-PEG-Lipoic acid

乙酰硫基-聚乙二醇-硫辛酸Acetylthio-PEG-Lipoic acid

氨氧基-聚乙二醇-硫辛酸Aminooxy-PEG-Lipoic acid

硝基苯基碳酸酯-聚乙二醇-硫辛酸NPC-PEG-Lipoic acid

琥珀酰亞胺酰胺琥珀酸-聚乙二醇-硫辛酸SAS-PEG-Lipoic acid

琥珀酰亞胺戊酸酯-聚乙二醇-硫辛酸SVA-PEG-Lipoic acid

環氧化物-聚乙二醇-硫辛酸Epoxides-PEG-Lipoic acid

戊酸-聚乙二醇-硫辛酸Valeric Acids-PEG-Lipoic acid

溴化物-聚乙二醇-硫辛酸Bromide-PEG-Lipoic acid

乙烯砜-聚乙二醇-硫辛酸VS-PEG-Lipoic acid

甲基丙烯酸酯-聚乙二醇-硫辛酸Methacrylate-PEG-Lipoic acid

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