金屬納米顆粒在醫學上有多種應用,涉及細菌、真菌和生物分子合成金屬納米顆粒的方法被認為是溫和、簡單和環保的,由于易于操作和具有遺傳修飾特性,細菌有望成為合成AgNPs的候選,然而,大多數細菌合成方法反應速度緩慢或者不適合大規模培養,因此,非致病菌更適合AgNP的合成,此外,太陽輻射能夠**的合成金納米粒子且減少能源成本。
一種用太陽照射法從芽孢桿菌淀粉酶和AgNO3的細胞提取物中制備了銀納米顆粒的方法,光強度、芽孢桿菌提取物濃度和NaCl添加量會影響AgNPs的合成。在較佳條件下(太陽能強度為70000 lx,提取物濃度為3 mg/mL,NaCl含量為2 mM),在80分鐘內將98.23±0.06%的Ag+(1 mM)還原為AgNPs,并且達到了AgNPs的電勢為70.84±0.66毫伏,TEM(透射電子顯微鏡)和XRD(X射線衍射)分析證實,合成了平均直徑為14.6 nm的圓形和三角形結晶AgNPs。由于熱滅活的提取物還介導了AgNPs的形成,因此酶促反應可能不參與AgNPs的形成。AgNPs的較高的絕對電位值,可能是由于與蛋白質相互作用引起的,這可能解釋了AgNPs懸浮液的高穩定性。AgNPs在液體和固體培養基中均顯示出對枯草芽孢桿菌和大腸桿菌的抗菌活性。
將淀粉芽孢桿菌 LSSE-62(含蛋白胨10)接種于LB培養基中進行培養制備無細胞芽孢桿菌提取物。研究不同反應條件(太陽輻射、無細胞提取物濃度和NaCl添加物)對合成AgNPs的影響。
**用4 mg/mL的無細胞提取物研究了不同太陽強度(30000、40000、50000、70000 lx)對AgNPs合成的影響,將一個樣品置于黑暗中作為對照,通過玻璃窗進行陽光照射,通過在樣品前放置不同的玻璃片并用TES 133A勒克斯儀測量光線來調節光強;隨后在70000 lx太陽強度下研究不同數量的細胞游離提取物(1,2,3,4 mg/mL)的影響,以不含提取物的AgNO3溶液為對照;在含有3 mg/mL提取物的混合物中,以70,000 lx的光強度測定NaCl的影響,NaCl濃度為0.5、1、2和3 mM。使用紫外可見分光光度計掃描反應混合物的紫外可見光譜來測定AgNPs的產量;用貝克曼庫爾特德爾薩納諾分析儀進行電位分析;用帶能量色散光譜系統的JEM-2010透射電子顯微鏡對AgNPs進行表征,計算顆粒粒徑分布;用Bruker Vecter 22 FTIR對AgNPs進行傅立葉變換紅外光譜分析;用擴散法測定固體LB培養基中的抗菌活性。
在含有4 mg/mL無細胞芽孢桿菌提取物并暴露于陽光下1分鐘的情況下,觀察到反應混合物的顏色從淺棕色變為黃色,并在100分鐘后,溶液變為橙紅色,可見區光譜的吸光度增加,在暗箱中孵育的樣品沒有觀察到這種變化(圖1a),顏色的變化是由于AgNPs在可見區域的表面等離子體共振,在不同光強下孵育,在423 nm左右得到了相同的主峰,這表明AgNPs的顆粒大小和形狀相似。膠體穩定性的理論**是電位的絕對值為30 mV,而超過50 mV的絕對值則表明分散度是高穩定的,在30,000 lx和40,000 lx時產生的AgNPs的絕對電位值分別為54.52±1.44 mV和71.70±1.96 mV,但在較高光強時產生的AgNPs的值無統計學差異(圖1b)。圖2顯示了在存在不同數量的無細胞提取物的情況下AgNPs的可見吸光度和,峰吸收強度隨細胞提取物濃度的增加而增加,在3 mg / mL提取液中獲得較大吸收強度。在通過真菌細胞提取物合成AgNPs的過程中,蛋白質參與了AgNPs的還原和穩定化,并通過與蛋白封蓋實現AgNPs的穩定。添加NaCl,在反應結束時,幾乎檢測不到殘留的Ag+,并且98.23±0.06%的Ag+被還原為AgNPs。合成的AgNPs的XRD光譜與粉末衍射標準聯合委員會的純結晶銀結構數據庫匹配,作者的研究表明,當采用其他細菌和真菌合成的AgNPs也為納米晶體形式。在液體培養中,試驗細菌枯草桿菌和大腸桿菌的生長受到AgNPs濃度依賴性的**。
由于熱變性的無細胞提取物在太陽輻射下能**地介導AgNPs的形成(圖3a),可見光和紫外光也可以介導AgNPs的合成,在細胞提取物存在的情況下,光驅動AgNPs合成的確切機制尚不清楚,但已證實含有羧酸的肽的參與,紅外光譜分析(圖3b)顯示,在1655和1543 cm-1處的條帶可以被認為是酰胺的羰基伸縮和酰胺的-N-H伸縮振動,1456 cm-1處的峰是由于氨基酸殘基羧基上COO-的對稱拉伸。AgNPs顯示了與無細胞提取物相同的特征帶,表明銀納米晶體被蛋白質包裹,對于用真菌提取物生產的AgNPs,被報道了相似的結果,由帶負電的蛋白質封端導致的AgNPs的高負電位性質可能是使AgNPs穩定的原因。
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zzj 2021.3.18