名稱：1M 醋酸鋰溶液/乙酸鋰溶液

英文名:1M Lithium Acetate solution

描述：齊岳出品的**酵母轉化試劑盒主要用于釀酒酵母質粒轉化實驗，該試劑盒遵循廣大用戶的使用習慣，分別提供PEG、LiAc和Carrier DNA溶液，PEG、LiAc均經過濾除菌，Carrier DNA經特殊優化處理，更有助于提高質粒DNA的轉化效率。該試劑盒可根據實際需要靈活配制1 × LiAc溶液和轉化預混液，既方便使用，又經濟實惠。

感受態細胞制備：

1.活化菌種。-80 ℃保存的菌種在YPDA培養基平板上劃線，30 ℃培養2-4天。

2.挑取酵母單菌落在YPDA培養基平板上劃3-5 mm的短線，30 ℃培養2-4天。

3.待酵母單菌落長至直徑2 mm時，把酵母細胞接種到3 mL YPDA液體培養基中，30 ℃過夜培養。

4.**天轉接到含有30-50 mL YPDA液體培養基的三角瓶中繼續培養，待OD600達到0.4-0.5，3000 rpm離心5 min，棄上清。

5.沉淀用30-50 mL的無菌的去離子水懸浮。3000 rpm離心5 min，棄上清。

6.沉淀用1.5 mL 1 × LiAc（150 μL 10 × LiAc Solution加1350 μL無菌水）重懸后轉移至1.5 mL離心管中，3000 rpm離心5 min，棄上清。

注意：10 × LiAc Solution經過pH緩沖，無需添加TE作為緩沖劑。

7.加入1 mL 1 × LiAc重懸，小體積轉化按照每管100 μL分裝，用于文庫轉化不分裝。

8.3000 rpm離心5 min，棄上清，感受態細胞即制備完畢。

注意：制備好的感受態**立即使用，在第8步離心前，室溫放置不應超過5小時。

轉化預混液配制：

酵母質粒轉化：

1.將360 μL預混液加入1支感受態細胞中，反復吹吸沉淀，使酵母細胞徹底懸浮于預混液中。

2.30 ℃的水浴鍋中孵育30 min，每10 min混勻一次。

3.（加入20 μL DMSO，可選）42 ℃的水浴鍋中熱擊30 min，每10 min混勻一次。

4.12000 rpm離心15 s，棄上清液。

5.（可選步驟）用1 mL YPD Plus Liquid Medium重新懸浮，30℃搖床震蕩培養30-60 min。12000 rpm離心15 s，棄上清液。

6.加入0.1-1 mL無菌去離子水或0.9%氯化鈉溶液重懸沉淀，涂篩選培養基平板，30 ℃培養2-4天。

酵母文庫轉化：（需用15-50 mL離心管）

1. 將2520 μL預混液加入到感受態細胞（未分裝）沉淀中，震蕩使感受態細胞充分重懸。

2. 放置在30 ℃的水浴鍋中孵育50 min，每10 min混勻一次。

3.（加入160 μL DMSO，可選）放置在42 ℃的水浴鍋中熱擊30 min，每10 min混勻一次。

4. 3000 rpm離心5 min，棄上清液。

5.（可選步驟）用3 mL YPD Plus Liquid Medium重懸沉淀，30 ℃搖床震蕩培養90 min，3000 rpm離心5min，棄上清液。

6.加入15 mL無菌去離子水或0.9% 氯化鈉溶液重懸菌體，涂篩選培養基平板（50個平板左右），30 ℃培養2-4天。

注意事項：

1.轉化全程需無菌操作。

2.初次使用Carrier DNA，請把裝有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min，然后立即放在冰上，用后-20℃儲存備用。下次使用前在冰上解凍Carrier DNA。反復凍融3-5次后需重新變性Carrier DNA。

3.PEG溶液在低溫環境下會析出，請于常溫環境下完全溶解后使用。

4. 根據質粒濃度增減體積，增加酵母質粒的純度和濃度可以提高轉化效率。

供應產品目錄：

EMMG培養基（含谷氨酸鈉） 2×500ml

EMMS培養基（含山梨醇） 2×500ml

EMM培養基（鈣鎂糖提供無菌母液） 10×0.5L

EMM培養基（過濾除菌） 2×500ml

EMM培養基（需過濾除菌） 10×0.5L

SDC液體培養基(酵母衰老實驗) 2×500mL

YE Agar Medium 10×0.5L

YE Medium 10×0.5L

YEP Agar Medium 10×0.5L

YEP Medium 10×0.5L

YEPM Agar Medium/YPM Agar Medium 10×0.5L

YEPM Medium/YPM Medium 10×0.5L

YES Agar Medium 10×0.5L

YES Medium 10×0.5L

YPDS Liquid Medium 100mL

YPS Agar Medium/YEPS Agar Medium 10×0.1L

YPS Medium/YEPS Medium 10×0.1L

低糖EMM培養基 2×500ml

酵母MM培養基/無機鹽培養基（2×） 2×500ml

缺磷EMM培養基 2×500ml

無糖EMM培養基 2×500ml

pGBKT7 DNA-BD Vector 酵母雙雜交克隆載體 20μl

pGBKT7-53 Vector 酵母雙雜交對照載體 20μl

pGBKT7-Lam Vector  酵母雙雜交對照載體 20μl

pGADT7-AD Vector 酵母雙雜交克隆載體 20μl

pGADT7-T Vector 酵母雙雜交對照載體 20μl

pBridge Vector 酵母三雜交克隆載體 20μl

pGBT9 Vector 酵母雙雜交克隆載體 20μl

Y2HGold Yeast Strain 酵母雙雜交用甘油菌 300μl

Y2HGold Chemically Competent Cell  酵母菌化學感受態細胞 100μl

Y187 Yeast Strain  酵母雙雜交用甘油菌 300μl

Y187 Chemically Competent Cell  酵母菌化學感受態細胞 100μl

yyp2021.2.22