薺菜[Capsella bursa-pastoris (L.) Medicus]屬于十字花科一年或兩年生草本植物，別名護生草、薺薺菜、香善菜、田兒菜、雀雀菜、地米菜等0。薺菜含有薺菜酸、生物堿、黃酮類化合物和多種氨基酸、維生素等成分，具有豐富的營養和很高的藥用價值12-3]。但是由于薺菜采摘期和貯藏期短，大大降低了其食用價值。為此，研究薺菜的保鮮、貯藏和加工過程中的衰老機理，對于綜合開發利用現有的資源具有重要的意義。

  近年來，對薺菜的研究主要局限在保鮮方法及其營養物質成分的提取上，但是從影響薺菜衰老的酚類物質和相關酶類方面研究未曾涉及。相關材料表明，過氧化物酶活性的增加是植物衰老的**特征之一，酚類物質則是過氧化物酶作用的直接底物。前期研究結果表明，在薺菜衰老的過程中，總酚和游離酚類含量下降，同時，POD活性增大，二者呈**正相關。酚類物質與植物組織的衰老和褐變密切相關。本實驗薺菜中的酚類物質鑒定和過氧化物酶底物特性，以期為薺菜的貯藏和保鮮加工提供一定理論依據。

方法

方法一：酚類物質的提取

  酚類物質的提取方法[13]:用甲醇作為溶劑，將薺菜和甲醇按照1:2(g/mL)的比例進行研磨，得提取液供實驗研究。

方法二： 酚類物質的紫外-可見光譜掃描

  取3mL薺菜酚類物質提取液置于石英比色皿中，在200~500nm紫外區域掃描，基線掃描以甲醇作為標準液。同時用甲醇配制濃度0.1 mmol/L的酚類標樣進行光譜掃描，與樣品紫外吸收光譜圖進行比較114]。

方法三：酚類物質的**液相色譜分析

  吸取2.0mL薺菜酚類物質提取液，以0.22 um有機膜過濾備用。色譜條件:色譜柱Agilent ZORBAX SB-Cis(46mm×250mm，5um);流動相用乙腈、水，乙腈體積由5%上升至35%;柱溫30℃;流速1 .0mL/min，檢測波長為280nm，進樣體積為20 uL。

方法四：過氧化物酶液的制備和酶活測定

  粗酶液的提取:準確稱取薺菜葉片樣品0.5g，放入研缽，放少許石英砂，加入pH7.8的瞬散綾作他6mL進行研磨，抽提后于低溫400Or/min離心，20min后收集上清液即為POD粗酶液。

方法五：過氧化物酶活性測定

  反應體系中依次加入2.0mL 0.1mol/L醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH5.4)，1mL酚類底物，50uL粗酶液，加入0.1mL 0.75% H:O:溶液，迅速顛倒混勻，于A4oo處測其吸光度，每30s讀數1次，計時3~5min。以磷酸緩沖液取代酶液作為空白管，以每分鐘在460nm吸光度變化0.001為1個酶活性單位。

方法六：酚類底物種類和濃度對POD活力的影響

  按底物種類分別為焦性沒食子酸、沒食子酸、綠原酸、兒茶酚、表兒茶酚、咖啡酸，底物濃度分別為4、6、8、 10mmol/L添加，然后放在30℃水浴鍋內靜置10min，取出后冷卻于波長460nm測定吸光度。以底物濃度為橫坐標，以△Asoo為縱坐標，繪制底物濃度曲線。

結果與分析

試驗將多種酚類標準樣品進行紫外掃描并與薺菜中酚類物質提取液的紫外吸收光譜進行對照(表1)。結合圖1，薺菜酚類提取物的吸收峰形有一個明顯的主峰，吸收波長在213nm。其薺菜酚類物質提取物與標樣焦性沒食子酸的紫外-可見掃描譜圖波形和**波長高度一致(圖1和表1)。而與兒茶酚、綠原酸和酪氨酸等標樣的吸收峰不同(表1)。因此，推斷薺菜中的主要酚類物質為焦性沒食子酸。

圖1薺菜酚類提取物(A)與焦性沒食子酸標樣(B)紫外吸收掃描圖

結論

  綜合薺菜酚類提取物的紫外掃描和**液相色譜的分析結果得出:薺菜中含有焦性沒食子酸、咖啡酸、表兒茶酚3種酚類物質，以焦性沒食子酸為主。薺菜中酚類物質的吸收波長是213nm。此外，薺菜酚類提取物的**液相色譜圖中保留時間為4.5min處的酚類物質還有待進一步確定。薺菜POD作用底物為綠原酸，酶促反應的底物濃度為8mmo1/L。

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