明膠甲基丙烯酰基(GelMA)水凝膠是一種具有可調諧特性的可見光交聯生物材料,已廣泛應用于組織工程。對于普通水凝膠中包載的細胞來說,由于缺乏血管網絡,其活性往往受到營養物質及氧氣濃度的影響,遠離凝膠表面的細胞在培養一定時間后會處于缺氧環境,這**降低了其存活幾率。當把載細胞水凝膠支架植入后,體內血管生成需要幾天到幾周的時間,在這一關鍵時間內,大多數移植細胞將在缺乏氧氣供應的情況下死亡。因此,向水凝膠中提供足夠的氧氣顯得尤為重要。一種可在細胞包載初期自發產生氧氣的GelMA基3D打印生物墨水。該體系通過向GelMA墨水中添加過氧化鈣(CPO)及過氧化氫酶以持續產生氧氣,提高了細胞的存活率。
墨水中氧氣產生機理:
過氧化鈣(CPO)分解為氧氣分兩步進行。**,CPO與水反應生成過氧化氫和氫氧化鈣,導致pH升高。隨后,過氧化氫分解為水和氧氣(圖1 A所示)。由于過氧化氫對細胞有毒性,所以加入過氧化氫酶使過氧化氫分解為氧氣。
流變與打印性能分析:
為了研究不同CPO加入量對GelMA生物墨水打印性能的影響,研究人員向10%的GelMA中加入了0.1%、0.5%、1%的CPO來制備釋放氧氣的生物墨水。如圖2A結果所示,當CPO添加量為0.5%時,墨水打印性能好。圖2B流變性能測試顯示,添加0.5% CPO的墨水其黏度高,可能是該墨水的pH值因CPO產生的氫氧根上升到GelMA等電點附近,使墨水黏度升高。CPO含量繼續升高后體系黏度反而下降,可打印性變差。
氧氣釋放與生物性能分析:
如圖3所示,不含CPO的水凝膠的氧氣含量為≈0%,而含有 CPO的水凝膠支架可持續釋放氧氣 7天。表明含有3D打印含CPO水凝膠支架能夠提供至少7天的有氧微環境。
檢測了CPO濃度0%、0.1%、0.5%和1%的GelMA支架中培養4天和7天的細胞活性。如圖4所示,將CPO濃度增加到1%時對成纖維細胞活性有負面影響。加入CPO可提高缺氧第4天和第7天的細胞存活率,與常氧水平相當。這意味著在GelMA生物墨水中使用CPO可以防止缺氧微環境的有害影響。
結果顯示,在生物墨水中添加CPO可以提高在低氧條件下孵育的打印支架細胞活力,這將有助于**缺血性疾病,例如心肌梗死。
圖5顯示了在低氧或常氧條件下含有0%或0.5% CPO的GelMA打印支架中心肌細胞活/死染色和相關的細胞活性定量。在具有0.5%CPO的支架中活細胞分布較為均勻。在孵育3、5和7天時,與不含CPO的支架相比,含有CPO的支架其活細胞數**增加。
西安齊岳生物是集化學科研和定制與一體的高科技化學公司,可以提供3D打印技術結合創新生物墨水材料,為打印出的細胞或組織提供更接近體內的生長環境,可應用于再生醫療和組織工程中心臟、皮膚、軟骨、骨骼等組織構建;以及體外檢測模型構建,來進行**代謝和篩選、化妝品檢測、生物材料研發和干細胞的體外分化等研究。
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以上內容來自小編zzj 2021.2.3