酵母單雜交及雙雜交系統

酵母單雜交系統主要用來分離鑒定與特異 DNA 序列結合作用的蛋白質并同時獲得其編碼基 因 。酵母單、雙雜交系統均利用了許多真核生物 轉錄激活因子 (transcription activator) ,如 GAL4 的 獨特結構特點 ,即自身含有功能上必須的兩個獨立 結構域2DNA 結合域與轉錄激活域。

在酵母單雜交 系統中 ,與轉錄激活域融合的結合蛋白與靶 DNA 序列的相互作用可以同樣激活報道基因的表達 ,而 酵母雙雜交系統中則利用此特點可以構建兩種雜合 蛋白 ,一種為已知蛋白 X 與 DNA 結合域融合的雜 合蛋白 ,一種為未知蛋白 Y與轉錄激活域間的融合 蛋白。當編碼此兩種相應雜合蛋白的表達質粒導入 酵母后 ,如果蛋白 X 和 Y 之間存在相互作用 ,則表 達產生的兩種雜合蛋白會由于這種相互作用使其中 的轉錄激活域進入其正常作用的啟動子 (UASG) 位 點而激活報道基因的表達(如 lacZ) 。其作用模式簡 圖見圖 1。

酵母三雜交系統

生物學中常常利用小的有機配體來研究闡明許 多生物學過程 ,如信號傳導和細胞分化調控等的發 生機制 ,配體2受體間的相互作用也是醫藥工業中藥 物設計的基礎。一旦某一受體被證明與某一疾病相 關 ,尋找能與此受體結合并調節其功能的配體小分子就顯得極為重要 ,因為這些配體分子可以作為被 開發**的**目標。在酵母雙雜交系統的基礎 上 ,Licitra 等結合合成有機化學生產的異源雜交配 體 ,建立了一種體內分析配體受體相互作用的三雜 交系統[8 ] 。這種系統不僅可以用來迅速分離鑒定 與已知配體分子相互作用的受體編碼 cDNA 基因 , 而且還能篩選已知受體的未知配體分子。其作用模 式見圖 2。

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