生物分離介質在分離純化中可除脂多糖

一、內毒素概念

內毒素，是革蘭氏陰性細菌細胞壁中的一種成分，叫做脂多糖。脂多糖對宿主是有毒性的。內毒素只有當細菌死亡溶解或用人工方法破壞菌細胞后才釋放出來，所以叫做內毒素。其毒性成分主要為類脂質A。內毒素位于細胞壁的較外層、覆蓋于細胞壁的黏肽上。各種細菌的內毒素的毒性作用較弱，大致相同，可引起發熱、微循環障礙、內毒素休克及播散性血管內凝血等。內毒素可以用鱟試劑檢測。

二、內毒素的去除

被污染的產品去除內毒素即使在生產中采取了**的工藝和嚴格的預防措施,原液仍有可能被污染,如何處理已被污染的原液是比較棘手的問題。因為原液中通常已加入保護劑,重新純化是非常困難的。如果原液及保護劑的分子量與內毒素分子量差別較大,那么選用適當的的超濾膜,通過超濾來去除內毒素是可能的,但由于膜吸附過程中產熱及系統殘留等原因,活性損失較大。

生物制品在生產過程中去除內毒素也是純化環節中重要一環節。生物制品的純化,主要是采用各種柱層析技術,如疏水層析、離子交換、親和層析、分子篩等,這些技術純化目標產品的同時也可以**去除內毒素。

三、各類層析介質去除內毒素原理和情況

1.分子篩：分子篩是利用凝膠的網狀結構根據分子大小進行分離的一種方法。一般重組產品分子量為幾萬道爾頓,而內毒素分子量為幾十萬至上百萬道爾頓,常是多聚體,因此利用分子篩可以**去除內毒素,但其處理量小,處理時間較長。

2.疏水層析：內毒素的脂肪A部份有很強的疏水性,但在高鹽下會凝集,無法掛上疏水層析柱。可選擇能結合目標蛋白的疏水介質而去除內毒素。

3.離子交換：離子交換法是通過帶電的溶質分子與離子交換劑中可交換的離子進行交換而達到分離純化的方法。內毒素在pH>2時帶負電荷,與陰離子交換介質Q Bio-sep FF或DEAE Bio-sep FF有較強結合,可在洗脫目標蛋白后用高鹽緩沖液或NaOH去除,這是離子交換法去除內毒素的基礎。Pharmacia公司已開發利用離子交換層析法從白蛋白中去除內毒素的工藝,主要采用DEAE Sepharose Fast Flow介質,將被內毒素污染的白蛋白上柱,白蛋白和大部分內毒素結合于介質上,先清洗掉不結合的內毒素,然后選擇性洗脫白蛋白。

.親合層析：親合層析技術,特別是免疫吸附劑在生產中的運用使得生物大分子的純化變得簡單。免疫吸附的原理基于抗原、抗體的特異性作用,以目標蛋白作為抗原,將通過雜交瘤技術生產的單克隆抗體偶聯于介質上,以此介質來吸附目標蛋白。由于相互作用的高度特異性,理論上僅有目標蛋白吸附于介質上,內毒素全部穿透,洗脫后將得到純度很高的無熱原產品。實際上,由于介質本身存在的非特異性吸附,仍有少量的雜蛋白和內毒素同時被吸附,但內毒素含量是**的。在干擾素(IFN)生產中,洗脫物內毒素含量一般為0.25EUmL-1。

目前較為**的處理方法是采用親和層析技術將毒素底物LAL或多粘菌素B(PMB)偶聯于CNBr activated Bio-sep FF或NHS-activated Bio-sep FF上,以此介質特異性吸附內毒素,而讓蛋白通過。

產品供應：

弱陰離子交換介質(DEAE)    

弱陽離子交換介質(CM)    

強陰離子交換介質(Q)    

強陽離子交換介質(SP)    

瓊脂糖親和介質(肝素)    

瓊脂糖親和介質(谷胱甘肽)    

瓊脂糖親和介質(Ni)    

瓊脂糖親和介質(藍膠)    

瓊脂糖親和介質(Protein A)    

疏水層析介質(苯基瓊脂糖)    

疏水層析介質(丁基瓊脂糖)    

疏水層析介質(丁基硫瓊脂糖)    

環氧活化瓊脂糖凝膠介質    

PST介質(30微米, 疏水)    

PHEMA介質(30微米, 親水)    

鎳離子瓊脂糖凝膠4FF/6FF    

鎳離子瓊脂糖凝膠4FF/6FF    

鎳離子瓊脂糖凝膠4FF/6FF    

耐堿Protein A 瓊脂糖凝膠4FF    

耐堿Protein A 瓊脂糖凝膠4FF    

耐堿Protein A 瓊脂糖凝膠4FF    

耐堿Protein A 瓊脂糖凝膠4FF    

Protein A 瓊脂糖凝膠4FF    

Protein A 瓊脂糖凝膠4FF    

Protein A 瓊脂糖凝膠4FF    

Protein A 瓊脂糖凝膠4B    

Protein A 瓊脂糖凝膠4B    

Protein A 瓊脂糖凝膠4B    

Protein G 瓊脂糖凝膠4FF    

Protein G 瓊脂糖凝膠4FF    

Protein G 瓊脂糖凝膠4FF    

Protein G 瓊脂糖凝膠4B    

Protein G 瓊脂糖凝膠4B    

Protein G 瓊脂糖凝膠4B    

DEAE高流速瓊脂糖微球（DEAE Bio-sep FF）    

Q高流速瓊脂糖微球（Q Bio-sep FF ）    

CM高流速瓊脂糖微球（CM Bio-sep FF）    

SP高流速瓊脂糖微球（SP Bio-sep FF）    

4B瓊脂糖微球（Bio-sep 4B）    

6B瓊脂糖微球（Bio-sep 6B）    

交聯4B瓊脂糖微球（Bio-sep CL4B）    

交聯6B瓊脂糖微球（Bio-sep CL6B）    

高流速4FF瓊脂糖微球（Bio-sep 4FF）    

高流速6FF瓊脂糖微球（Bio-sep 6FF）    

高濃度瓊脂糖微球    

苯基高流速瓊脂糖微球（Phenyl Bio-sep FF）    

丁基4B瓊脂糖微球（Butyl Bio-sep 4B）    

高流速丁基瓊脂糖微球（Butyl Bio-Sep 4FF）    

螯合高流速瓊脂糖微球（Chelating Bio-sep FF）(IDA)    

螯合高流速瓊脂糖微球（Chelating Bio-sep FF）(NTA)    

溴化氰高流速4FF瓊脂糖微球（CNBr Bio-sep 4FF）    

氨己基4B瓊脂糖微球（EAH Bio-sep 4B）    

羧戊基4B瓊脂糖微球（ECH Bio-sep 4B）    

環氧活化高流速瓊脂糖微球（Epoxy-activated Bio-sep FF）    

去內毒素瓊脂糖微球6B/6FF（Endotoxin Removal Bio-sep 6B/6FF）    

肝素高流速瓊脂糖微球（Heparin Bio-sep 6FF）    

藍色高流速瓊脂糖微球（Blue Bio-sep 6FF）    

明膠瓊脂糖微球 4B/4FF（Gelatin Bio-sep 4B/4FF）    

賴氨酸瓊脂糖微球4B（Lysine Bio-sep 4B）    

硼酸高流速瓊脂糖微球    

Protein A 高流速4B瓊脂糖微球    

ConA 高流速4B瓊脂糖微球    

上述產品齊岳生物均可供應，僅用于科研！

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