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熒光標記

多孔納米

葉酸靶向修飾納米紅細胞膜包裹阿霉素FA/PEG-DOX-Nano-RBCs(納米藥物遞釋系統)

發布時間：2021-01-29 作者：axc 分享到：

西安齊岳生物科技有限公司是一家集工業生產，分子生物、生化試劑、常規試劑、常用耗材與進口試劑代理生物科研公司，齊岳生物擁有一站式實驗室采購服務能力，產品鏈供應完備，涉及有機金屬試劑、常用生化試劑、分子生物學試劑、分子生物學領域等相關產品、現我們提供定制產品葉酸靶向修飾納米紅細胞膜包裹阿霉素FA/PEG-DOX-Nano-RBCs產品，將制備方法總結如下：

本研究采用低滲裂解法及納米擠出工藝，制備了葉酸和聚乙二醇共同修飾的納米紅細胞膜藥物載體，并以此負載鹽酸阿霉素構建了一種具有長循環和藥物靶向雙重作用的新型納米**遞釋系統（FA/PEG-DOX-Nano-RBCs）。該載藥系統利用了紅細胞膜的生物相容性， PEG 長循環作用及葉酸配體的**識別靶向特性，有望提高阿霉素的抗**藥效，降低其毒副作用，

FA/PEG-DOX-Nano-RBCs的制備流程圖如圖1所示,其具體操作過程如下:

（1）壓積紅細胞的提取

大鼠眼眶靜脈叢取全血,4000 rpm離心10min棄去血漿和白細胞層，加入4倍體積預冷的 PBS溶液充分吹打，4000rpm離心10min棄上清，并重復上述操作3次，得到壓積紅細胞。

（2）血影紅細胞（ghost）的制備

取1mL 壓積紅細胞，加入4倍體積低滲0.25×PBS 溶液4 ℃孵育20 min （5 min 上下顛倒一次），6000rpm 離心10min，棄上清，再加入4倍體積低滲PBS溶液反復清洗直到上清無色，制得血影紅細胞。

葉酸配體修飾過程制備

取相同體積PBS配制的FA-PEG-DSPE 以 mPEG-DSPE溶液加入上述制備的血影細胞中，于37℃搖床上孵育1h，4000rpm離心5min去除游離FA-PEG-DSPE及mPEG-DSPE，制得葉酸及PEG修飾后的血影紅細胞。

（4）FA/PEG-DOX-RBCs的制備

取1mL經葉酸修飾的血影紅細胞，加入4倍體積一定濃度的DOX（溶于0.25×PBS）溶液， 4℃條件下振搖孵育30min，加入計算體積的10×PBS濃縮液，室溫振搖孵育90min。 6000rpm 離心10 min，棄上清，用 PBS 溶液洗滌三次，充分棄去游離 DOX，加入 4 倍體積PBS溶液，混勻，得到 FA/PEG-DOX-RBCs混懸液。

(5)FA/PEG-DOX-Nano-RBC的制備

取上述制備的 FA/PEG-DOX-RBCs 混懸液 5 mL，藥物用 20%功率探頭超聲5min，其次采用脂質擠出法使其依次通過 800 nm、 400 nm、 200 nm、 100 nm 孔徑的聚碳酸酯膜 21 次，得到 FA/PEG-DOX-Nano-RBC 混懸液。將FA/PEG-DOX-Nano-RBC 混懸液置于 5 mL 超濾離心管內， 6000 rpm離心 10 min，甩去游離 DOX，將超濾離心后得到的 FA/PEG-DOX-Nano-RBC 重新懸浮于 PBS溶液中， 4 ℃避光儲存于冰箱中備用。