熒光素（Luciferin）是常見生物性發(fā)光基因熒光素酶（Luciferase）作用原理是熒光素酶在Mg2+和O2參與下催化熒光素氧化成oxyluciferin,在熒光素的氧化過程中，發(fā)出生物熒光(bioluminomescence),然后通過化學(xué)發(fā)光儀或液閃測(cè)定儀測(cè)定生物熒光。

有三種產(chǎn)品形式，D-熒光素（游離酸），D-熒光素鈉鹽，以及D-熒光素鉀鹽。這三種產(chǎn)品主要的差別在于溶解特性上:

D-熒光素（游離酸）水溶性以及緩沖體系的溶解性都很弱，除非溶于弱堿如NaOH和KOH溶液。

溶于甲醇（10mg/ml）和DMSO（50mg/ml）。

外觀:淡黃色固體

熔點(diǎn):200-204℃

儲(chǔ)存:-20℃低溫避光保存

結(jié)構(gòu)式

使用方法：

1 體外生物發(fā)光檢測(cè)

1）1g的D-Luciferin Firefly, free acid溶解入33.3ml的無菌水中，配制成30mg/ml的儲(chǔ)存液（200×）。混勻后用0.2μm濾膜過濾，然后立即使用或分裝于-80℃避光保存，避免反復(fù)凍融，凍存的儲(chǔ)存液可保存1年。注：D-Luciferin Firefly, free acid儲(chǔ)存液也可用弱堿（如 NaOH，KOH溶液）或DMSO溶解，用堿性pH溶液去溶解本品，如果有沉淀發(fā)生則需要調(diào)整pH更高直完全溶解。之后可以重新用酸性溶液來中和，調(diào)整所需的pH環(huán)境。

2）用完全培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液按 1:200稀釋（儲(chǔ)存液：完全培養(yǎng)基1:200），配制成工作液（終濃度150μg/ml）。

3） 成像前，去除培Luciferase表達(dá)細(xì)胞中的培養(yǎng)基，加入1×熒光素工作液37℃孵育5min, 然后進(jìn)行圖像分析。

4）工作液應(yīng)在使用后丟棄。

2 體內(nèi)活體成像檢測(cè)

1）1g的D-Luciferin Firefly, free acid用66.6ml的DPBS(, w/o Mg2+ 和Ca2+)配制 D-熒光素工作液（15mg/ml），0.2μm 濾膜過濾除菌。混勻后立即使用或分裝于-80℃避光保存，避免反復(fù)凍融。一旦使用，放到 4℃解凍，保持冰冷且避光，凍存的儲(chǔ)存液可保存1年。注：D-Luciferin Firefly, free acid儲(chǔ)存液也可用弱堿或DMSO（w/o Mg2+）配置。

2） 每只老鼠的注射量取決于老鼠的體重：150mg/Kg。

3） 注射入體內(nèi) 10-15min后，進(jìn)行成像分析。注：建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，從而確定信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。

相關(guān)產(chǎn)品

 D-熒光素

D-熒光素鉀鹽

2-氰基-6-羥基苯并噻唑

熒光素酶

4-硝基苯-Β-D-吡喃葡萄糖苷

2,2'-聯(lián)氮雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽

2-硝基苯-beta-D-半乳糖苷

魯米諾單鈉鹽

3-(-10-吩噻嗪基)丙烷-1-磺酸鈉 PTZ-343

4-(4-甲基-4,5-二氫-1H-咪唑-2-基)苯酚

5-(十四酰氨基)熒光素

吖啶酯（NSP-SA-NHS）

異魯米諾

吖啶酯 （ME-DMAE-NHS）

吖啶酸丙磺酸鹽(NSP-SA)

9-吖啶甲酸

辣根過氧化物酶(HRP)

5-羧基四甲基羅丹明

5-羧基熒光素

NSP-SA-ADH 吖啶酰肼

 SANH

 4-SFB

C6-4-SFB

SMCC

以上內(nèi)容來自齊岳小編zzj 2021.1.28