一、磁珠分選原理
磁珠分選是基于細胞表面抗原能與偶聯抗體的磁珠特異性結合,從而使細胞被標記。標記好的細胞過柱子(柱子周圍連磁鐵)時,帶磁珠的細胞就留在柱子上,不帶磁珠的細胞就流走了,從而實現目的細胞的分選。
二、細胞標記方式
利用磁珠分選細胞的關鍵點就是細胞標記。標記方式有兩種,包括直接標記和間接標記。
1、 直接標記
直接標記就是標記目的細胞,是較快速、較特異的磁性標記方法。目前有多種分選人、小鼠、大鼠以及非人類靈長類細胞的MACS直標微珠可供選用。
2、 間接標記
間接標記就是標記非目的細胞,需要聯合使用單克隆或多克隆抗體和微珠。未結合抗體、生物、生物素化抗體或熒光素標記抗體均可作為一抗標記細胞,再使用抗免疫球蛋白微珠、抗生物素或鏈霉親和素微珠、抗熒光素微珠等作為二抗磁性標記細胞。
三、磁珠分選策略
根據細胞標記方式可以選擇不同的磁珠分選策略。
1陽性分選
陽性分選是目的細胞被磁性標記,并直接分選出來,標記的細胞可富集10000倍。分選后的細胞不必去除微珠,可立即培養或后續操作,其優勢是純度高,回收率高,操作迅速,操作簡便。
2陰性分選
陰性分選又叫去除分選,磁性標記非目的細胞,從而將非目的細胞從細胞混合物中去除。其適用范圍包括以下幾個方面:
① 去除不需要細胞;
② 缺乏針對目的細胞的特異性抗體;
③ 不需要抗體和目的細胞結合,如T細胞、B細胞、NK細胞功能分析;
④ 需要進一步通過陽性選擇分選細胞亞群。
3復合分選
復合分選其實就是陰性分選和陽性分選的結合。如先陰性分選,去除非目的細胞,然后再陽性分選,獲取目的細胞。這種分選策略的適用范圍包括:
①非目的細胞也表達用來陽性分選目的細胞的抗原;
② 要分選稀有、珍貴細胞,先去除非目的細胞再陽性分選,可獲得高純度目的細胞。