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基于細胞表面抗原能與偶聯抗體的磁珠特異性結合的免疫磁珠分選
發布時間:2021-01-28     作者:wyf   分享到:

一、磁珠分選原理

磁珠分選是基于細胞表面抗原能與偶聯抗體的磁珠特異性結合,從而使細胞被標記。標記好的細胞過柱子(柱子周圍連磁鐵)時,帶磁珠的細胞就留在柱子上,不帶磁珠的細胞就流走了,從而實現目的細胞的分選。

二、細胞標記方式

利用磁珠分選細胞的關鍵點就是細胞標記。標記方式有兩種,包括直接標記和間接標記。

1、  直接標記

直接標記就是標記目的細胞,是快速、特異的磁性標記方法。目前有多種分選人、小鼠、大鼠以及非人類靈長類細胞的MACS直標微珠可供選用。

 

2、  間接標記

間接標記就是標記非目的細胞,需要聯合使用單克隆或多克隆抗體和微珠。未結合抗體、生物、生物素化抗體或熒光素標記抗體均可作為一抗標記細胞,再使用抗免疫球蛋白微珠、抗生物素或鏈霉親和素微珠、抗熒光素微珠等作為二抗磁性標記細胞。

 

三、磁珠分選策略

根據細胞標記方式可以選擇不同的磁珠分選策略。

1陽性分選

陽性分選是目的細胞被磁性標記,并直接分選出來,標記的細胞可富集10000倍。分選后的細胞不必去除微珠,可立即培養或后續操作,其優勢是純度高,回收率高,操作迅速,操作簡便。

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2陰性分選

陰性分選又叫去除分選,磁性標記非目的細胞,從而將非目的細胞從細胞混合物中去除。其適用范圍包括以下幾個方面:

去除不需要細胞;

缺乏針對目的細胞的特異性抗體;

不需要抗體和目的細胞結合,如T細胞、B細胞、NK細胞功能分析;

需要進一步通過陽性選擇分選細胞亞群。

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3復合分選

復合分選其實就是陰性分選和陽性分選的結合。如先陰性分選,去除非目的細胞,然后再陽性分選,獲取目的細胞。這種分選策略的適用范圍包括:

非目的細胞也表達用來陽性分選目的細胞的抗原;

要分選稀有、珍貴細胞,先去除非目的細胞再陽性分選,可獲得高純度目的細胞。

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