革蘭氏染液染色的步驟分析
其次介紹染色步驟:
1.涂片固定。
在干凈的載玻片滴加一滴蒸餾水,用接種環進行無菌操作,挑取培養物少許,置載玻片的水滴中,與水混合做成菌懸液并涂布成直徑約1cm的薄層。為避免因菌數過多聚集成團,不利于觀察細菌個體形態,可在載玻片一側進行上述操作,而在另一側再加一滴水,從已涂布的菌液中再取一環于此水滴中進行稀釋,涂布成薄層。若材料為液體培養物或固體培養物中洗下制備的菌液,則直接涂布于載玻片上即可,如菌液濃度較大,也可使用水滴再進行一次稀釋。
涂片需要在室溫條件下使其自然干燥,有時為了使之干得更快些,可將標本面向上,手持載玻片一端的兩側,小心地在酒精燈火焰上方較高的位置微微加熱,使水分蒸發,但切勿緊靠火焰或加熱時間過長,以防標本烤枯而變形。
標本干燥后即進行固定,
固定常常利用高溫,手執載玻片的一端(涂有標本的遠端),標本向上,在酒精燈火焰外層盡快的來回通過3-4次,共約2s-3s,并不時以載玻片背面加熱,載玻片背面觸皮膚,以不覺過燙為宜(不超過60℃),待放置冷后,再進行染色。
2.染色。
在固定過的涂片菌膜上滴加草酸銨結晶紫染液,染色液應完全覆蓋整個菌膜,染色1min。
3.水洗。
染色到一定的時間,拿住玻片使之成450角,用細小的水流把多余的染料沖洗掉,被菌體吸附的染料則保留。
4.媒染。
加碘液覆蓋涂面染1 min。在媒染處理時,媒染劑與染料形成不溶性的化合物,可增加染料和細菌的親和力。
5.水洗。
用細小的水流緩慢沖洗涂片上的染色液,用吸水紙吸干。
6.脫色。
加95%酒精數滴,并輕輕搖動進行脫色,20s-30 s后再進行水洗,吸去水分。
7.復染。
蕃紅染色液染色10 s后, 自來水沖洗。
8.干燥。
染色結果,革蘭氏正反應菌體都呈紫色,負反應菌體都呈紅色。
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以上內容來自小編zzj 2021.1.19