動物組織基因組提取試劑盒

本試劑盒采用具有獨特分離作用的磁珠和緩沖液系統(tǒng)，從樣品中分離純化**基因組DNA，特殊包被的磁珠，在一定條件下對目的DNA具有很強(qiáng)的親和力，而當(dāng)條件改變時，磁珠釋放吸附的DNA，能夠達(dá)到快速分離純化DNA的目的。整個過程不涉及有毒試劑，安全、便捷、提取的DNA純度高。使用本試劑盒純化的基因組DNA均在1.7~2.0之間，可以應(yīng)用到各類下游分子生物學(xué)實驗。

適用范圍

從動物組織中提取基因組DNA，適用于核酸自動化提取平臺。

試劑盒包裝及組成

圖譜：

注意事項

1、磁珠使用前一定要充分混勻。

2、如果下游實驗對RNA污染比較敏感，可在裂解時加1μl RNaseA（10mg/ml）。

3、如果是干材料，適當(dāng)延長裂解時間；種子用粉碎機(jī)打成粉末狀使用，樣品為種子時，裂解時間為30min。

4、如果同等取樣量下欲得到更多DNA可以增加洗脫次數(shù)（洗脫次數(shù)**不要超過3次），也可以適當(dāng)延長裂解時間。

5、取材量參照下面表格

材料 取樣量

動物肌肉組織 <50mg

脂肪 <50mg

脾臟 <20mg

肝臟 <20mg

胰臟 <20mg

操作步驟

1、裂解

取新鮮動物組織10mg～50mg，與研缽中研磨。加入480μl裂解液S1、120μl裂解液S2、20μl蛋白酶K，研磨均勻，然后轉(zhuǎn)移至1.5ml EP管中，吹打或點陣混合均勻。然后把EP管置于恒溫水箱中65℃溫育15～30min。

2.結(jié)合

將EP管從溫育設(shè)備中取出，12000rpm離心10min。取500μl上清，加入振蕩混勻的磁珠30μl、500μl結(jié)合液(也可加入500μl異丙醇，產(chǎn)量高于加結(jié)合液,但A260/A280略有降低，不影響下游實驗)，顛倒混勻2min，時文靜置1min。將EP管置于磁力架上進(jìn)行磁分離，吸棄廢液（注意吸凈管蓋及管底殘液）。

3.洗滌

⑴加入600μl 70%乙醇，吸打或點振5～10次，然后磁分離，注意吸凈管蓋及管底的殘液；

⑵重復(fù)步驟⑴一次，室溫下開蓋干燥10-20min或恒溫箱（不高于55℃）內(nèi)開蓋干燥5min，注意防止污染。

4.洗脫

加入100μl洗脫液，緩慢抽吸混勻，65℃溫浴10min。每隔2～3min輕搖EP管幾下混勻。然后磁分離，小心吸取上清液至新的EP管中，即可進(jìn)行下游實驗。

常見問題及參考意見

得率低

（1）樣品沒有研磨充分，請盡量將樣品研磨充分；

（2）組織沒有完全裂解完，裂解時間不夠或沒有離心直接進(jìn)行下一步操作；

可適當(dāng)延長裂解時間，**不超過60min。樣品裂解后，請一定要離心后再進(jìn)行下一步操作；

（3）結(jié)合不充分；

結(jié)合過程中要使磁珠一直處于懸浮狀態(tài)，并且充分顛倒混勻；

（4）取樣量大于說明書給出量；

取樣量請嚴(yán)格按照說明書操作。

條帶彌散

（1）樣品不新鮮或反復(fù)凍融多次：盡量用新鮮樣品進(jìn)行試驗，如果樣品需要保存，可根據(jù)試驗，分裝保存樣品，盡量避免反復(fù)凍融；

（2）研磨時間太長，造成核酸降解：請研磨盡量迅速，防止DNA降解；

（3）環(huán)境溫度太高：可以將研缽置于-20℃預(yù)冷或置于液氮保存后再進(jìn)行研磨，如果所提取材料基因組極易降解，可用液氮研磨；

（4）裂解時間太長：裂解時間不要超過60min；

（5）提取后模板DNA放置時間太長：提取后如有需要，請盡量及時進(jìn)行電泳試驗。短期內(nèi)可置于4℃保存，長期請置于-20℃保存（盡量注意避免反復(fù)凍融）。

DNA液有顏色

（1）洗滌過程不充分：如果結(jié)合后磁珠呈團(tuán)狀、絲狀或顆粒狀，要增加點震力度及次數(shù)，充分吹打混勻。

（2）裂解不充分：將組織充分研磨、適當(dāng)增加裂解液S1和S2用量，也可以延長裂解時間。

（3）樣品用量大于說明書給出量而其他試劑用量沒有相應(yīng)調(diào)整：嚴(yán)格按照說明書操作，如果需要增大樣本量，可以等比例增大裂解液S1、S2、蛋白酶K以及磁珠用量，其他試劑用量可不改變。

DNA樣品不純，干擾后續(xù)實驗

（1）DNA液有乙醇?xì)埩簦合礈鞎r，請注意吸凈管蓋及管底的殘液。此外，磁珠應(yīng)完全干燥，保證無乙醇?xì)埩簟?/p>

（2）磁珠洗滌不充分：加入70%乙醇時，請吸打或點振混勻。如有必要，可增加一次洗滌步驟。

（3）DNA液中吸入磁珠：如果不小心吸入磁珠，請將上清液返回原管，待磁珠完全吸附至管壁后重新吸取上清。或者將吸取的上清液10，000rpm離心2min，再取上清。

（4）DNA液中含有蛋白質(zhì)等雜質(zhì)：建議適當(dāng)減少樣品用量。

（5）DNA液中含有輕微鹽離子等雜質(zhì)，此為TE保存液正常現(xiàn)象，不影響下游實驗。如有特殊需要，可使用等量的經(jīng)高壓滅菌的去離子水作為洗脫液。為方便實驗，可將獲得的DNA液置于-20℃環(huán)境分裝保存。

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