分析13C或15N標記的中心碳代謝及相關途徑的極性代謝物

    提出了一種基于靶向串聯質譜分析（LC-MS / MS）的方法，用于分析極性代謝物的13C或15N標記情況。該平臺利用三重四極桿（QQQ）質譜儀，極性切換的選擇性反應監測模式（SRM）和酰胺親水作用液相色譜（HILIC），捕獲碳和氮在選定代謝物中的離子對。本方案是對先前發表的非標記靶向代謝組學方案的擴展，并已廣泛用于追蹤各種生物樣本（例如，體外細胞培養實驗和經靜脈注射小鼠體內標記）中營養物質的代謝，如13C標記的葡萄糖，13C-谷氨酰胺和15N-谷氨酰胺等。

     對SRM信號進行積分，生成每種標記形式的峰面積陣列。將處理后的數據用于獲得目標分子標記的程度和分布（稱為代謝流量組學）。每種方法都可以基于已知的未標記Q1 / Q3 SRM離子對而定制，并根據相應的13C或15N標記情況進行調整。從標記實驗、代謝物提取到峰積分，單個樣品的整個過程大約需要6-7小時。

實驗步驟

1 提取代謝物并添加同位素標記。代謝物可以從多種不同的生物來源樣本中提取，根據樣本類型和實驗目的選擇相應的提取方法，然后考察確定標記時間。

2 設置MS方法。根據正負離子檢測模式調整Q1 / Q3 SRM離子對列表，匹配每種代謝物的13C或15N標記類型。

3 將樣品重懸于約20-25 μL LC-MS級水中，然后通過自動進樣器進樣5 μL，使用步驟2中Analyst軟件中定義的靶向采集方法。

4 使用分析和峰積分軟件（例如SCIEX的MultiQuant），在質譜圖中查找13C/15N標記峰以及未標記的12C峰。

5 作為SRM的替代方法：可以進行高分辨率LC-MS / MS分析，高分辨質譜儀應在MS和MS / MS模式下均具有**精度且有極性切換功能，例如QExactive Orbitrap的數據相關采集（DDA）模式。

結果

此平臺可用于分析未標記（12C或14N）和標記（13C或15N）的代謝物。應根據生物學問題選擇靶向SRM LC-MS/MS方法，提供了超過140個全標記代謝物的分析方法和多達40-50個獨特代謝物的同位素分析。圖1 是靶向13C代謝組學工作流程，展示了從代謝物提取、LC-MS / MS采集到數據統計分析的整套流程。

產品供應：

上述產品僅用于科研，不可用于人體實驗！

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