液相分離(親水性和疏水性)和質(zhì)譜聯(lián)用的技術(shù)鑒定老鼠以及酵母中的同位素代謝物。
研究方向有:質(zhì)譜蛋白質(zhì)組學(xué)和代謝組學(xué)、阿爾茨海默病的分子發(fā)病機(jī)制、泛素和蛋白質(zhì)組Turnover和**癥的系統(tǒng)生物學(xué)。
高通量非靶向代謝組學(xué)通常依賴于互補(bǔ)液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)方法來(lái)擴(kuò)大各種代謝物的覆蓋范圍,但這些方法的集成尚無(wú)法完全表征。我們系統(tǒng)地研究了8種LC-MS設(shè)置,不同固定相(HILIC和C18),流動(dòng)相(酸性和堿性pH)下親水相互作用液相色譜(HILIC)-MS和納流反相液相色譜(nRPLC)-MS的性能)和MS電離模式(正負(fù))。之前曾報(bào)道過(guò)nRPLC-MS的優(yōu)化,但我們?cè)?/span>HILIC-MS(2.1 mm×150 mm)中發(fā)現(xiàn),通過(guò)從2 mg細(xì)胞/組織樣本。由于峰特征受到污染物的高度損害,因此我們使用穩(wěn)定同位素標(biāo)記的酵母來(lái)增強(qiáng)配方鑒定,以比較不同的LC-MS條件。8種LC-MS設(shè)置可檢測(cè)總共1050個(gè)配方,其中**組合分別為4種,3種和2種LC-MS可以回收78%,73%和62%的配方。此外,在存在或不存在氮饑餓的情況下收集這些酵母樣品,從而能夠?qū)Ρ容^的配方和代謝物結(jié)構(gòu)進(jìn)行定量比較,然后使用選定的合成代謝物進(jìn)行驗(yàn)證。
結(jié)果表明,氮饑餓會(huì)下調(diào)氨基酸成分,但會(huì)上調(diào)尿苷相關(guān)的代謝。
用兩種不同的液相分離(親水性和疏水性)和質(zhì)譜聯(lián)用的技術(shù),鑒定老鼠以及酵母中的同位素代謝物。設(shè)定了較佳的鑒定參數(shù),并且對(duì)正常酵母和氮饑餓的酵母樣品,進(jìn)行同位素代謝組學(xué)鑒定。
反相液相色譜法(reverse-phase liquid chromatography,RPLC)是代謝組學(xué)中較常見(jiàn)和實(shí)用的一種LC分離方法。但是缺點(diǎn)是對(duì)于強(qiáng)極性物質(zhì)保留較差。親水相互作用液相色譜(hydrophilic interaction liquid chromatography,HILIC)是近年來(lái)色譜領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。
它通過(guò)采用強(qiáng)極性度固定相,并且結(jié)合高比例有機(jī)相和低比例水相作為流動(dòng)相。此前文章報(bào)道的RPLC和HILIC是主要集中在特征峰的數(shù)目方面,還沒(méi)有文章系統(tǒng)比較這兩種方法在代謝組學(xué)上的鑒定和分析。